抗体保存指南.PDFVIP

抗体保存指南 不同类型抗体的保存指南, 用以避免抗体污染或损伤 请不时核查数据表以获取特定保存建议。对于未正确保存的 抗体, Abcam 不予保证。如果恰当保存和处理, 大多数抗体 应能保持活性数月乃至数年。 保存温度和条件 对于我们的很 多抗体而言, 分装成小等份并冻存于 -20℃ 或 -80℃ 是最佳保存条件 。分装成小等 份可最大程度减少由冻融造成的损伤, 以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需 冻融一次, 如有剩余, 可将剩余物保存于 4 ℃。在收到抗体时 ，在 10,000 × g 下离心 20 秒以沉积 截留于试剂瓶螺纹的溶液, 并以小等份转移至低蛋 白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验 人员在实验 中通常采用的量。小等份应不小于 10μl ；等份越小, 储液浓度因抗体蒸发及吸附于保 存瓶表面而受到的影响越大。 在大多数情况下, 收到抗体时在 4 ℃ 下保存一至两周, 然后再冷冻进行长期保存是可接受的, 但也 许腹水液是例外, 它可能包含蛋 白酶, 因而应该尽快冻存 。同样, 遵照数据表上的建议是重要的。 免责条款和其它特别条件 ： ? 酶偶联抗体不应冻存, 而应保存于 4℃。冻融不仅影响抗体结合能力, 还会降低酶活性。 ? 无论偶联至荧光染料、酶还是生物素, 偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹。暴露于 光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响, 在实验的所有阶段都应避光。 ? IgG3 同型抗体具有解冻时形成聚集物的独特趋势 ，应始终保存于 4℃。 用叠氮化钠防止污染 为了防止微生物污染, 可将叠氮化 技 术 帮 助 : 钠加入抗体制备品中达到 0.02% /technical ( /v) 的终浓度。很 多 Abcam 抗 - 体 已经包含这种防腐剂, 所用浓度 范围为 0.02 至 0.05%。这会标示 在数据表上标题为 “保存缓冲液” 的栏 目。 不使用叠氮化钠的情形: ? 如果用抗体染色或处理活细胞, 或如果用抗体进行体 内研究, 一定要使用不包含叠氮化钠的制 备品。该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性: 它阻断细胞色素电子传递系统。 ? 叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联, 应在偶联进行前除去。偶联后, 抗体可保存于叠氮化钠 中, 除此以外, 0.01% 硫汞撒 (硫柳汞) 不含伯胺, 也是可接受的替代物。 叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液 中除去。IgG 的分子量为 150,000 道尔顿 (IgM 为约 600,000); 叠氮化钠的分子量为 65 道尔顿。截留分子量为 14,000 道尔顿的微透析装置可保留抗 体 同时使叠氮化物向外扩 。在保持于 4 ℃ 的磁性搅拌器上的烧杯 中，每毫升抗体使用至少一升 冷 PBS 并搅拌透析装置 6 小时。更换 PBS 两次, 每次更换搅拌至少 6 小时。如有可能 ，所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。 /technical 冷冻/融化损伤 重复冷冻/融化循环可使抗体变性, 导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。 保存于 -20℃ 对于大多数抗体是适当的; 保存于 -80℃ 无明显优势。冰箱不能为无霜型。 这些冷 冻和融化之间的循环 (以减少结霜) 恰恰是应该避免的。出于相 同原因, 抗体试剂瓶应置于具有最 小温度波动的冰箱 区域, 例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。 有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到 50% 的终浓度以防止冷冻/融化损伤; 甘油可将凝固点降 低至低于 -20℃。虽然这对于很 多抗体是可接受的, 但是只有一小部分我们提供的抗体测试了在该 保存条件下的稳定性, 并且我们的保证仅适用于按数据表上推荐的方式保存的抗体 。不建议将包 含甘油的溶液保存于 -80℃, 因为该温度低于甘油的凝固点。请注意甘油可被细菌污染。如果加入 甘油或任何冷冻保护剂, 则应当小心操作, 以得到无菌制备物。 应避免抗体在稀释至工作浓度后在 4℃ 下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解, 理想的浓度为 1 mg/ml 或更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如 BSA 作为稳定剂的理论基础。 加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。对于打算进行偶联的抗体而言, 由于稳定蛋白质会与抗体竞争, 降低了偶联的效率, 所以不应加入稳定蛋白质。 欢迎登陆 Abcam中国网站 ., 查找