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【答案】(1)4 Y Y小鼠的血清抗体效价最高 (2)B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的,且融合率达不到100% (3)1 100 (4)不能无限增殖 【解析】(1)分析题图可知,经4次免疫后,小鼠Y的血清抗体效价就可达到16 000以上。由于4次免疫后的Y小鼠的血清抗体效价最高,故最适合用于制备B淋巴细胞。(2)细胞 融合实验中,由于细胞融合是随机的,而且诱导融合率不可能达到100%,所以会有未融合的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞、融合的具有同种核的细胞和杂交瘤细胞三种类型。(3)杂交瘤细胞同时具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的核物质,但细胞核只有一个。由于杂交瘤细胞在分裂过程中染色体会丢失,故细胞核中染色体数目最多是40+60=100(条)。(4)B淋巴细胞已经分化,没有无限增殖的潜能。 单克隆抗体制备过程的几个问题分析 (1)对动物免疫的原因:B淋巴细胞要经过免疫过程,即接触抗原,增殖分化为有特异性免疫功能的B淋巴细胞,才能产生相应的抗体,所以,与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞实际上是浆细胞。 (2)在单克隆抗体制备过程中,一般认为有两次筛选过程,第一次是筛选出杂交瘤细胞(用选择培养基),第二次是进一步筛选出能产生人们所需要抗体的杂交瘤细胞。 (3)杂交瘤细胞具备双亲的遗传物质,不仅具有浆细胞产生特异性抗体的能力,还具有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的能力,从而可以克服单纯B淋巴细胞不能无限增殖的缺点,而大量生产单克隆抗体。 归纳点拨 4.(2016河北衡水模拟调研四,40)血管内皮生长因子(VEGF)是目前发现的诱导肿瘤血管生成的最强烈的血锌生成因子,针对VEGF生产的抗肿瘤药物,是治疗癌症的一个方向;芝加哥大学的Katherine Knight博士成功地在转基因兔中获得骨髄瘤样肿瘤,经技术改进,能高产量地生产兔单克隆抗体;我国江苏省某公司首次在全球成功开发出人源化兔单抗药物“注射用人源化抗VEGF单克隆抗体”(SIM63),有效打破了跨国公司的技术垄断。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应。请回答下列相关问题: (1)动物细胞在体外培养的技术属于__________工程,由于人们对动物细胞所需的营养物质没有完全搞清楚,在使用合成培养基时,通常需要加入__________等一些天然成分:在培养时除提供细胞所需的O2外,还需要CO2,其作用是____________________。 (2)在基因工程中,将目的基因导入动物细胞现今极常用、极有效的方法是__________,要在短时间内扩增大量的目的基因采用____________技术,这个技术中的关键酶是______________。 (3)当VEGF作为抗原进入动物体内时,动物体内的某些B细胞分化为浆细胞,这种浆细胞只分泌针对VEGF的一种抗体,但B细胞在体外培养不会无限增殖,解决这一问题的方法是通过动物细胞融合技术得到杂交瘤细胞,常用的化学诱导融合试剂为____________,要分离出杂交瘤细胞,应该用__________培养基进行筛选,单克隆抗体最主要的优点是它的______________________________,并可大量制备。 【答案】(1)动物细胞 血清(或血浆) 维持培养液的pH (2)显微注射 PCR(多聚酶链式反应) Taq酶(热稳定DNA聚合酶) (3)聚乙二醇(PEG) 选择 特异性强、灵敏度高 【真题印证】(2016课标全国Ⅱ,40)下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物(二倍体)的流程。 回答下列问题: (1)图中A表示正常细胞核,染色体数为2n,则其性染色体的组成可为_________。过程①表示去除细胞核,该过程 一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行,去核时常采用___________的方法。②代表的过程是____________。 (2)经过多次传代后,供体细胞中________________的稳定性会降低,因此,选材时必须关注传代次数。 (3)若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同,从遗传物质的角度分析其原因是_______________________。 (4)与克隆羊“多莉(利)”培养成功一样,其他克隆动物的成功获得也证明了_________________________。 【答案】(1)XX或XY 显微操作(去核法) 胚胎移植 (2)遗传物质 (3)卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响 (4)已经分化的动物体细胞核具有全能性 【解析】(1)提供体细胞的供体可能为雌性,也可能为雄性,因此图中A(
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