人卵巢癌裸小鼠动物模型染色体畸变分析.pdfVIP

华东地区第十届实验动物科学学术交流会 293 人卵巢癌裸小鼠动物模型染色体畸变分析 田泽敏1，余继英2，刘志勇-，褚芳， (1．江西省劳动卫生职业病防治研究所，南昌330006；2．江西省儿童医院，南昌330006) 【摘要】目的分析人卵巢癌裸小鼠动物模型实体瘤细胞遗传学改变。方法取裸小鼠动物模型 第17代肿瘤移植成活实体瘤及骨髓标本采用常规染色体制片方法制片、阅片、分析。结果人 卵巢癌动物模型实体瘤染色体异常以数目畸变为主，细胞畸变率迭61．76％，主要表现形式为亚二 倍体(39条1遗传核型，人卵巢癌动物模型骨髓细胞染色体也发生了畸变，细胞畸变率达15．94％， 结论用人卵巢癌组织皮下移植免疫缺陷小鼠，成功建立了人卵巢癌裸小鼠动物模型，通过染 色体分析有较稳定的亚二倍体(39条)遗传核型，移植成活率100％，肝、脾转移率100％，是不可 多得的卵巢癌动物模型，在筛选抗癌、抗转移药及研究肿瘤的转移机理和防治方面具有实用价值。 【关键词】人卵巢癌；皮下移植；裸小鼠；染色体；畸变 人卵巢癌裸小鼠动物模型是江西省劳动卫生职业病防治研究所“卵巢癌动物模型的建立与应用”课 状腺癌IIIC期组织，经裸小鼠皮下移植17代目前移植成活率100％，肝、脾转移率100％，成功建立了 人卵巢癌动物模型，肝脾转移动物模型。为了解人卵巢癌动物模型实体瘤的细胞遗传学特征，作者对该 瘤株进行了染色体畸变分析。 1材料和方法 1．1实验动物 1．2原发癌瘤株 人卵巢浆液性乳头状腺癌IIIc期手术标本由江西省妇幼保健院提供(患者术前未进行放疗或化疗)，移 植成功后传代17代。 1．3方法 参照《化学品毒性鉴定技术规范》2005【-】。 1．3．1分组BALB／cnu．nu裸小鼠6只，雌性，鼠令6周，体重18～22 g。共分成两组，每组3只，二 组接种实体瘤，另一组不作任何处理作阴性对照。 1．3．2肿瘤接种方法将第17代裸小鼠卵巢癌新鲜组织切成1,-一2mm3小块，分别接种于裸小鼠腋部皮下。 d肉眼观察肿瘤长至2 h腹 1．3．3取样时间接种后约40 cm3左右时断延髓处死动物取样。动物处死前6 腔注射2mg／kg剂量秋水仙素。 ml 1．3．4取样断延髓处死动物，6只动物均取两侧股骨，清除肌肉，剪去两端骨骺。以注射器吸取5 生理盐水，将针头插入骨髓腔，冲洗骨髓细胞于10ml离心管中，直至细胞全部冲净，以吸管用力吹 r／rain离心6 打细胞，使细胞团块分散，1000 rain，弃上清。实体瘤组剥离肿瘤，挑选供血丰富的瘤 华东地区第十届实验动物科学学术交流会 体组织t用200日铜网在少量生理盐水中研磨成细胞悬液，取5～6滴于10ml生理盐水中，以吸管吹打 000 细胞均匀，1 r／mia离心6min。弃上清。 】3．5低渗将O 吸管充分扣匀，置37℃水浴巾20—30rain。 1 3．6固定将lml新鲜配置的扭l定液加入低渗液的试管中．吹打一次预嘲定，将细胞1000r／min离心 5～8 rain．弃上清。加入固定液4m1．将细胞轻轻吹判，霞37℃水浴中静置20min．1000r／min离心 5 min，弃上清。加入固定液重复【目定一次，最后放^4℃冰箱过夜或制片。 1 3 000 7制H终二次尉定的细胞悬液1 r／min离心5rain，弃上清，加0．5ml新鲜固定液吹散细胞，用 冰水滴片法制片，火焰干燥。 1 38染色根据室温用Giemsa染色10～30rain，取出玻片用蒸馏水冲洗后晾十。 1 3．9镜栓先在低倍最徽镜下寻找背景清晰、分散良好、染色体适中的中期分裂相，然后用油镜观察， 每H动物至少观察50个中期分裂相细胞，记录实体瘤组肿瘤细胞、骨髓细胞以及对照组