人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor的基因克隆与序列分析.pdfVIP

2013年23(1) 生 物 技 术 论 著 RESEARCH PAPERS 人丝氨酸蛋 白酶抑制因子 Hespintor的基因克隆与序列分析 伦永志 ，冯洁 ，李欣悦 ，王雪蕾 (1．大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室，辽宁大连 116622；2．大连大学生命科学与技术学院，辽宁大连 l16622) 摘要：目的：克隆得到人丝氨酸蛋白酶抑制因子 Hespintor基因，并应用生物信息学方法进行序列分析。方法：提取HepG2细 胞总RNA，RT—PCR扩增Hespintor基因片段，连接至pMD20一T克隆载体中，转化JM109宿主菌，蓝 白斑法筛选阳性克隆菌落， 菌落PCR及测序鉴定。利用在线工具软件对Hespintor进行信号肽预测、亚细胞定位、结构域、三级结构、基因染色体定位及组织 分布表达分析。结果：人丝氨酸蛋 白酶抑制因子Hespintor基因全长285bp，共编码94aa，其中1—23aa编码信号肽，符合亚细胞定 位于细胞外的预测；53—93aa编码一个典型的Kazal结构域。Hespintor基 因的染色体定位于5号染色体短臂3区3带 1亚带 (5q33．1)；正常组织中仅在睾丸有表达，而肿瘤组织中仅在生殖细胞瘤有表达。结论：Hespintor是一个在机体中静止表达的Ka— zal型丝氨酸蛋白酶抑制因子家族的分泌型新成员。 关键词：丝氨酸蛋白酶抑制因子；Hespintor；逆转录PCR；基因克隆；生物信息学 中图分类号：R373 文献标识码：A doi：10．3969／j．issn．1004—311X．2013．01．001 GeneCloningandSequenceAnalysisofHuman SerineProteaseInllibit0rHespintor LUN Yong—zhi。FENGJie 。LIXin—yue。WANGXue—lei (1．LiaoningProvincialUniversityKeyLaboratoryofBiophysics，CollegeofMedicine，DalianUniversity，DalianI16622，China； 2．CollegeofLifeScienceandTechnology，Dalina University，Dalina 116622，China) Abstract：Objective：Toclonehuman serineproteinase inhibitorHespintor，andanalyze encoding sequencebybioinformatics methods．Method：ThetotalRNA wasextractedfrom HepG2cellsasthetemplate．HespintorgenewasamplifiedbyRT—PCR．na dligated intopMD20一Tcloningvector．thenthecompetentJM109E coliwastransformed．Th emasculinecloningcolonywasscreenedbyblue— white—spot．AfterPCR ofcolonyandsequencing，thecorrectDNA fragmentwasidentified．Next，Onlinetoolswereemployedtonaalyze andpredicthtestructureandfunctionofHespintor，includingsignalpeptide，subcellularlocalization，domain，tertiarystructure，genomiclo- cationandtissueexpression．Result：Th efulllengthcDNA ofHespintorwas 285bpencodingaproteinof94媳 Itwaspredictedhtatthe1— 23aawas singalpeptide，andthe53—93aawas atypicalKazaldomain．Th erefore，thesu