人参皂甙Rb1和黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌细胞因子的影响.pdfVIP

．20． 中国畜牧兽医学会中兽医学分会2005年学术年会论文集 =茹：= =：：==：===：====： 人参皂甙Rbl和黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管 内皮细胞分泌细胞因子的影响 解慧梅1，一，穆祥2，黄会岭1，胡格2，索占伟2，张涛1，刘易通1，尹 龙2，徐 亮2 (1．河北农业大学动物科技学院，河北保定071000；2．北京农学院动物科学系) 摘要： 为了探讨人参皂甙Rbl和黄芪多糖对微血管内皮细胞分泌细胞因子的影响， 为分析其增强免疫作用的机制提供试验依据，用体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞，用硝酸 且对细胞的影响呈刹量依赖性。 关键词：黄芪多糖；人参皂甙Rbl；微血管内皮细胞；NO；IL一6；TNF一仅 endothelial 细胞第Ⅷ因子相关抗原(F一ⅧRAg)鉴定为血管 血管内皮细胞(Vascular cells， VECs)很长一段时间被认为是机体和外界之间物内皮细胞。 质交换屏障，随着显微镜、细胞培养和分子生物学 1．2．3培养细胞的处理及分组选取经鉴定的大 的发展，发现内皮细胞在机体的免疫应答和炎性 鼠肠黏膜微血管内皮细胞于48孔培养板中培养， 反应过程中起到非常重要的作用¨1。人参皂甙 待细胞数量为1×105时吸弃各孔中原有培养基， ml。每5 Rbl和黄芪多糖都具有提高机体免疫功能，本试 然后加入含有下述药物的维持培养基0．5 验旨在研究人参皂甙Rbl和黄芪多糖对微血管 孔重复(即n=5)。 A组：对照。 内皮细胞分泌NO、IL一6和TNF—n的影响，为 进一步阐明其免疫作用机制。 B组：不同浓度、不同时间段黄芪多糖对正常 1材料与方法 肠黏膜微血管内皮细胞分泌细胞因子的影响，在 1．1药品及材料 细胞培养孔中分别添加以下浓度维持培养基。 黄芪(产予山西≥购自北京同仁堂；人参皂甙 黄芪多糖(450“g／柚)、黄芪多糖(900肛g／“)。 购自中国药品生物制品检定所；NO检测试剂盒、 C组：不同浓度、不同时间段人参皂甙Rbl对 正常肠黏膜微血管内皮细胞分泌细胞因子的影响， IL一6试剂盒和TNF—Of．购自深圳晶美生物工程 公司。 在细胞培养孔中分另I工添加以下浓度维持培养液。 720型紫外分光光度计(UNICO公司)；96孔 (80wg／m1)。 酶标仪(BIO—RAD公司)；MCO一17AC型CO， 1．2．4样品采集及测定指标各组细胞在培养 恒温培养箱(日本三洋公司)；DMB5型倒置显微 000 镜(厦门麦克奥迪公司)。 l、3,4、6和9h，分别收集培养上清液经3 r／min 离心10 1．2试验方法 rain，将细胞上清液无菌分装于离心管中，于 一20℃条件保存。 1．2．1黄芪多糖按照水提醇沉法心l提取黄芪 NO的测定(硝酸还原酶法)，按照试剂盒说 多糖，其含量测定用硫酸蒽酮法。 明操作，予5