化学发光酶免疫分析法检测人血清中cTnI的研究.pdfVIP

第26卷，第7期 光谱学与光谱分析 V01．26，No．7，pp291—292 and 200 sr)ectralAnalysis July，2006 6年7月 Spectroscopy 化学发光酶免疫分析法检测人血清中cTnI的研究 郭会时“2～，张寄南“，杨笛2，何农跃“ 1．广东省韶关学院化学系，广东韶关512005 2．江苏省人民医院心血管病研究所，江苏南京210029 3．东南大学生物电子学国家重点实验室，江苏南京210096 摘要文章在传统ELISA法的基础上，在进行免疫反应后，改用高效化学发光试剂AMPPD作为检测底 物，并将传统两步双抗夹心法改为一步法进行免疫反应，建立了一种高灵敏度的测定人血清中心肌肌钙蛋 白I(cTnI)的化学发光酶免疫分析法。采用单因素变化法和方阵滴定法优化丁实验条件。该方法具有很高的 灵敏度，检出限为0．02ng·mL-1，比传统EIJSA法检测限降低一个数量级以上；检测范围为0．04～36．2 ng·nlL～，比传统ELISA法扩宽了近两个数量级；方法准确可靠，重复性好，加标试验回收率介于97．5％ ～102．8％之间，应用于实际样品测定，结果满意。 主题词心肌肌钙蛋白l(cTnl)}化学发光酶免疫分析法；A』㈣ 中圈分类号：R542．2文献标识码：A 文章编号：1000-0593(2006)07-0291—02 本文在传统ELISA法的基础上，在进行免疫反应后，改以l：100稀释的AMPPD作为发光反应底物，选择发光反 用高效的化学发光试剂3-(2L螺旋金剐烷)一4一甲氧基一4一(3-应条件为37℃10min(见图4)。 羟基)苯一1，2-二氧杂环丁烷磷酸(AMPPD)作为检测底物，并 且将传统的两步双抗夹心法改为一步法进行免疫反应，建立 了测定人血清中cTnI的化学发光酶免疫分析法。采用单因 素变化法和方阵滴定法得到的最佳实验条件为：捕获抗体 (IgGl)包被浓度选择10嵋·mL，选择pH7．0的磷酸盐 嚣_目oo 缓冲液(PBS)作为免疫反应缓冲底液(图1)，以含1％牛血 清白蛋白(BSA)的pH9．6碳酸盐缓冲液4℃封闭过夜，生 物素撒测抗体(BiotimlgG2)以及碱性磷酸酶一亲和素(ALP- Avidin)结合物的稀释度均采用l，2000，免疫反应条件为 ∥redn Selectionofinmlmmreaetion缅l* 37℃孵育60min(见图2)，以去离子水作为洗涤剂(见图3)， Fig．2 1 cTnl A：O{B：0．4；C：1．8，D：3．6{E：18．1ng·mL pH cTnl(ng^nL) Selectionoftheimmmmreaction Fig．1