2016届二轮复习 基因工程 讲义.docVIP

第1讲基因工程与克隆技术(基础自修课) 考点一 基因工程 1．在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答： (1)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、________________、将目的基因导入受体细胞、________________________。 (2)A过程需要的酶有________和________。 (3)要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用________处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为________态，然后将________________________在缓冲液中混合培养完成转化过程。 (4)含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过C________和E________。如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的培养基中加入________。 (5)目的基因能否在棉花植株体内维持和表达其遗传特性的关键是_________________。这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是____________________。 解析：(1)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。(2)基因表达载体的构建过程中，需要用同种限制酶切割目的基因和载体，使它们产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶把这两个DNA片段连接起来。(3)农杆菌转化法导入目的基因时，首先必须用Ca2＋处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态，然后将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程。(4)植物组织培养过程的关键步骤是脱分化和再分化。因为只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长，故若要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的培养基中加入卡那霉素。(5)目的基因能否在棉花植株体内维持和表达其遗传特性的关键是目的基因是否插入受体细胞的DNA分子上，检测采用的方法是DNA分子杂交技术。 答案：(1)基因表达载体的构建　目的基因的检测与鉴定 (2)限制酶　DNA连接酶 (3)Ca2＋　感受　重组质粒和感受态细胞 (4)脱分化　再分化　卡那霉素 (5)目的基因是否插入受体细胞的DNA分子上　DNA分子杂交技术 2．(2015·福建高考)GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如下图1所示)，并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答： (1)在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是________________________________________。 (2)构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的________限制酶进行酶切。 (3)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有3种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图1所示)。为鉴定这3种连接方式，选择HpaⅠ酶和BamHⅠ酶对筛选得到的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如上图2所示。图中第________泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。 (4)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的________与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定密度时，需进行________培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。 解析：(1)在动物细胞培养中，胰蛋白酶的作用是使细胞分散开。(2)由图可知，在GDNF基因两侧各有一个XhoⅠ酶切位点，在载体上有一个XhoⅠ酶切位点，使用该酶既可以将GDNF基因切割下来，又可以将其插入到载体中。(3)用HpaⅠ酶和BamHⅠ酶对3种载体进行双酶切，然后对得到的DNA分子片段进行电泳分析。对于载体自连的DNA分子来说，只有HpaⅠ酶切位点，切割后只有一种片段，长度为6 000 bp；对于正向连接的载体来说，切割后产生两种片段6 000 bp和700(600＋100)bp；对于反向连接的载体来说，切割后产生两种片段6 500 bp和200(100＋100) bp。所以第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。(4)鉴定目的基因是否成功表达，可用抗原－抗体杂交法。用相应的抗体与提取的蛋白质杂交，若有杂交带，说明目的基因成功表达。当培养的细胞达到一定数量时，需进行传代培养以获得更多数量的细胞。 答案：(1)使细胞分散开　(2)Xho　(3)　(4)抗体　传代 3．我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程