半滑舌鳎群体遗传结构的AFLP与线粒体DNA序列变异分析.pdfVIP

疆毽覆仃 第三届海洋生物高技术地坛 2005．08．19．23 半滑舌鳎群体遗传结构的AFLP 与线粒体DNA序列变异分析+ 韩志强1‘2 庄志猛1+ 刘进贤2 高天翔2王志勇3 (1农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室，黄海水产研究所，青岛266071 021) 2中国海洋大学水产学院，青岛，266003；3集美大学水产学院，厦门，361 摘要：采用AFLP标记和线粒体细胞色素b(Cytb)基因序列片段分析技术研究半滑舌鳎群体 遗传多样性。采用5对选择性引物对半滑舌鳎黄海、渤海野生群体和人工养殖群体进行了 AFLP分析，共扩增出315个位点，黄海、渤海、养殖群体的多态位点比例为49．8％、44．5％、 表明，黄1海群体的遗传多样性高于渤海群体，养殖群体的遗传遗传多样性最低。利用Shannon 多样性指数和基因分化系数进行遗传变异来源估算，表明群体遗传分化很小。对黄海、渤海 b)基因片段序列进行了分析，共检测出5种单 野生群体共38个个体线粒体细胞色素b(Cyt 倍型，渤海群体内个体序列完全相同，共享单倍型H1；在黄海群体中除检测到单倍型H1外， 还检测到其余四种单倍型。Cytb序列分析结果表明，黄海群体遗传多样性较渤海群体丰富， b基因的部分序列和现代 个体问序列变异很小，个体间核苷酸差异数在0．1之间。根据Cyt 渤海形成的历史推测，黄海一部分半滑舌鳎群体在10000年左右进入渤海生活。 关键词：半滑舌鳎遗传多样性AFLP细胞色素b序列分析 semilaevis 半滑舌鳎(Cynoglossus 型名贵经济鱼类，在我幽沿海均有分布，以黄渤海最为习见fl】。半滑舌鳎活动范围小、营养 等级低、食性温和，具有个体大、生长快和市场价值高等优良性状，是一种理想的增养殖对 象‘21。 AFLP(AmplifiedPolymoqghism)标记具有重复性好、信息量大、孟德 FragmentLength 尔遗传等特点，现已被广泛应用到遗传图谱构建、分子育种、指纹分析及遗传多样性分析等 研究领域[3-8]。AFLP技术在鱼类群体遗传多样性上的研究已有报道[6-8]，证明该技术是一种灵 敏有效的研究鱼类群体多样性的手段。动物线粒体DNA呈共价闭环双链结构，分子量约为 16．5kb，绝大多数表现为母系遗传。在一级结构上，其进化率为核DNA的5～10倍。线 b) 粒体DNA己成为研究动物起源进化及群体遗传分析理想的研究对象。细胞色b基因(Cyt 为线粒体DNA上的蛋白质编码基冈，其进化速度较快，适合种群水平差异的检测，研究最 为广泛‘91。 +罔家863汁划(2004AA603320)和国家自然科学基金资助项目； +通讯作者。E—mail：zhuangzm@ysfri．ac．cn 福建曩n‘ 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 有关半滑舌鳎的研究报道大多涉及该物种的渔业生物学和繁殖生物学等方面[10-12】，尚未 见有关半滑舌鳎遗传背景方面的研究报道。本文报道利用AFLP和线粒体细胞色素b基因序 列分析技术检测分布与黄渤海区半滑舌鳎群体遗传多样性，旨在丰富对半滑舌鳎种质资源的 认识和为半滑舌鳎遗传育种提供基础资料。 l材料与方法 1．1材料 实验用野生半滑舌鳎群体分别取自渤海和黄海：养殖群体由莱州市明波水产公司提供， 亲本来源于渤海海区。对采集的新鲜样品或活体样品进行生物学测定后，取鱼背部肌肉组织 -j一_70。C保存备用。本实验随机抽取每个群体30个课题用于AFLP分析；分别抽取18个黄海 群个体和19个渤海群个体用于线粒体细胞色素b基因序列分析。 1．2DAN提取