HIF―1a、VEGF、MVD在大肠腺癌组织中的表达及临床意义.docVIP

HIF―1a、VEGF、MVD在大肠腺癌组织中的表达及临床意义 　　[摘要]目的探讨HIF-1a、VEGF、MVD（用抗CD34抗体标记）在大肠腺癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测广东医学院附属医院经病理检查证实的手术切除标本或活检组织中HIF-1a、VEGF、MVD的表达情况，其中38例大肠腺癌组织、22例大肠腺瘤组织、29例正常大肠组织。结果HIF-1a、VEGF在大肠腺癌组的阳性表达率分别为73.7%、65.8%，明显高于大肠腺瘤组、正常大肠组，差异有统计学意义（P0.05）。大肠腺癌、大肠腺瘤、正常大肠组织中MVD值分别是（52.36±9.66）、（30.23±5.22）、（21.37±4.755），MVD值在腺癌中明显高于腺瘤及正常肠组织（P0.05）。28例HIF-1a呈阳性表达的大肠腺癌组织MVD值为（53.22±10.15）；呈阴性表达的10例中MVD值为（42.75±10.47），呈正相关关系（rs=0.392，P0.05）。VEGF呈阳性表达的25例大肠腺癌组织MVD值为（54.54±9.60）；呈阴性表达的10例中MVD值为（42.63±9.80），呈正相关关系（rs=0.491，P0.05）。结论在大肠腺癌组织中HIF-1a和VEGF的表达明显高于大肠腺瘤组织和正常大肠组织，提示HIF-1a和VEGF可能参与大肠腺癌的发展。MVD值在大肠腺癌中的表达明显高于大肠腺瘤组织和正常大肠组织，提示大肠腺癌中血管生成较大肠腺瘤组织和正常大肠组织丰富；MVD值是衡量大肠腺癌发展、浸润及转移的重要指标。HIF-1a、VEGF的表达与MVD值在大肠腺癌组织中均呈正相关，提示HIF-1a、VEGF可能与大癌发展过程中血管生成密切相关。 　　[关键词]大肠腺癌；HIF-1a；VEGF；MVD 　　大肠癌包括结肠癌和直肠癌，是最常见的消化道恶性肿瘤之一。虽然目前对大肠癌采用了以手术切除为主的综合治疗，但其治疗效果仍不够理想，而术后的局部复发和远处转移则是影响术后生存率的重要因素。因此，深入研究大肠癌浸润和转移的可能机制，从分子水平找到可用于提示大肠癌转移和预后判断的分子标志物，既可预警大肠癌的术后复发、转移，及早对可能复发和转移的大肠癌患者进行放化疗或靶向治疗，亦可研究这些因子可否成为肿瘤治疗中的新靶点，对提高患者生存率、评估患者的预后及临床治疗有现实的意义。本课题运用免疫组织化学的方法检测HIF-1a、VEGF、MVD在大肠腺癌的表达情况，并分析其相关性，探讨它们与大肠腺癌临床病理参数间的关系及在大肠腺癌中与血管生成的关系，旨在对大肠腺癌恶性程度的判定、预后分析及生物学治疗提供有效的理论依据。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　收集广东医学院附属医院经病理检查证实的手术切除标本或活检组织，其中大肠腺癌38例；正常大肠组织29例（距肿瘤边缘5cm处的正常黏膜）；大肠腺瘤组织22例。所有标本均经40g/L缓冲中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，每个标本蜡块行4μm厚度连续切片。所有患者手术前未接受放疗、化疗，每例有详细的临床资料、手术记录。38例大肠腺癌中男21例，女17例；年龄在29～84岁（其中≤60岁20例，60岁18例，平均年龄59.42岁）；直肠癌16例，结肠癌22例；病理学分级：高分化5例，中分化25例，低分化8例；大肠腺癌TMN分期根据2002美国癌症联合会（AJCC）的分期标准进行分期：Ⅰ期6例，Ⅱ16期例，Ⅲ期15例，Ⅳ期1例；有淋巴结转移16例，没有淋巴结转移22例。 　　1.2实验方法 　　采用链菌素抗生物素蛋白一过氧化物酶法（S-P法）检测μm、VEGF、CD34蛋白的表达，一抗为兔抗人HIF-1a多克隆抗体（1：50），兔抗人VEGF多克隆抗体（1：50），兔抗人CD34多克隆抗体（1：50），试剂均购于武汉博士德生物工程有限公司。 　　1.3结果判断标准 　　HIF-1a、VEGF表达水平采用Fromowitz阳性细胞半定量分级法。首先根据阳性细胞占整个肿瘤细胞的百分数记分：≤5%记为0分；6%～25%为1分；26%～50%为2分；51%～75%为3分；75%为4分。再根据阳性细胞染色深浅记分，阴性为0分；淡黄色为1分；棕黄色为2分，棕褐色为3分。最后将二者分数相加，0～1分记为（一），2～3分记为（+）；4～5分记为（++）；6～7分记为（+++），其中（-）～（+）视为阴性，（++）～（+++）视为阳性。 　　微血管计数参照Weidner的方法：任何与邻近的微血管、肿瘤细胞及其它相连组织有明显分界的被CD34染成棕黄色的内皮细胞或内皮细胞簇均视为一个血管计数，首先在低倍镜（40和100倍）下选取癌视野中微血管最密集的3个区域