基于双层聚邻苯二胺金胶的电位型乙脑疫苗免疫传感器的研究.pdfVIP

基于双层聚邻苯二胺／金胶的电位型乙脑疫苗免疫传感器的研究 毖凌惑袁若．，柴雅琴 (西南师范大学化学化工学院，重庆市现代分析化学重点实验室，重庆400715) 电位型免疫传感器因其设备简单、响应快而受到越来越多的关注，但其低的灵敏度 仍是一个急待解决的问题。本文采用自组装技术，先在铂(Pt)电极上电聚合一层邻苯 二胺膜，然后通过聚合膜上的氨基吸附金胶，此电聚合和结合纳米金的过程重复两次后， 形成拥有丰富金胶的双层聚邻苯二胺／金胶膜，从而增大了结台的抗体(乙脑抗血清)的 量，而且被结合的抗体还能很好的保持活性Ⅲ，因此提高了传感器的灵敏度。实验证明该 传感器具有响应快、灵敏度高、稳定性好等优点。 结果与讨论 1．电极制各过程 在Pt电极上电聚合邻苯二胺口】，常温放置过夜后，将电极浸入约16 nm的纳米金溶 液常温4h。此电聚合和结合纳米金的过程重复两次后浸入乙脑抗血清4℃3h，最后 以牛血清白蛋白封闭非特异结台位点。 2．抗体固定的方法选择 抗体固定的方法选择见如图l。图1(a)表示抗体固定在双层聚邻苯二胺／金胶膜修饰 的电极的线性范围．由图l(a)可见该固定方法制备的电极有很宽的线性范围和灵敏度。 图1(b)为抗体固定在一层聚邻苯二胺／金胶膜修饰的电极的线性范围，由图1(b)表明该 线性范围较窄．且易达到饱和。因此在实验中选择双层聚邻苯二胺／金胶膜固定抗体。 80 60 ， 墨40 q 20 O The calibration ofdifferent to modified-electrodesthe Fig·1 plots concentration ofJapanese B vaccine． encephalitis 3．实验条件的优化 ’联系人：裹若E-mail：yuanruo@swnu．edu．fJn Fax：(023家自然科学基金及重庆市自然科学 基金瓷助 — 48 min 讨论了pH值及反应时间对测定结果的影响。结果表明在pH=7．4，反应时间为5 时，修饰电极对乙脑疫苗的响应最好。 4．线性范围和检出线 unit) 的范围内与电极的响应成线性关系，在选定的最佳实验条件下，该传感器的检出线为 6×i04 igpfu／mL。 5．修饰电极的稳定性和重现性 7．0的磷酸盐缓冲溶液的上方，4。C下放置30d，此电极可保持 将修饰电极悬挂于pH 对乙脑疫苗原响应的93．096。 6．应用 用该传感器检测四份乙脑疫苗样品，其回收率是96．7％-105．0％。 参考文献： a1．TaIanta，2003，9：981 1．c．X．Li，S．Q．Hu，G．L．Shen，et 2．L．Y 222 Communication，2