基于双抗夹心的CrylB毒素蛋白质TRFIA检测方法的建立与评价.pdfVIP

江苏农业学报 (Jiangsu ofAgr．Sci．)，2013，29(1)：184～188 184 徐重新，陈莎莎，张 霄，等．基于双抗夹心的CrylB毒素蛋白质TRFIA检测方法的建立与评价[J]．江苏农业学报，2013，29 (1)：184-188． doi：10．3969／j．issn2013．O1．032 基于双抗夹心的 CrylB毒素蛋 白质 TRFIA检测方法 的建立与评价 徐重新 ， 陈莎莎 ， 张 霄 ， 刘 媛 ， 张存政 ， 黄 鹰 ， 刘贤进 (1．南京师范大学生命科学学院，江苏省微生物与功能基因组学重点实验室，江苏 南京 210023；2．江苏省农业科学院食品质 量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室，江苏 南京 210014) 摘要： 为了建立检测 CrylB毒素蛋白质的双抗夹心时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法，利用稀土元素 Eu“作为示踪剂 ，以可溶性表达的抗 Cry1B毒素蛋 白质单链抗体 (scFv)作为捕获抗体，以免疫兔血清获得的抗 CrylB毒素蛋白质多克隆抗体为检测抗体，建立检测CrylB抗原的TRFIA技术，并对其进行方法学的综合评价。通 过正交试验，获得的最佳单链抗体 (Captureantibody)、多克隆抗体 (Detectionantibody)、Eun标记的二抗 (Traceran- tibody)浓度分别是2．500 ml、2．000 ml、1．000 ml。标准检测曲线灵敏度为0．170ng／ml，线性测量范围 为1．000～800．000rig／ml。抗原类似物间无交叉反应。CrylB毒蛋白质在大米 中添加 回收的批内变异系数为 3．8％～6．6％、平均回收率为80．5％～84．8％，批间变异系数为2．2％ ～8．5％、平均回收率为84．1％～88．4％。表 明本试验建立的双抗夹心CrylBTRFIA检测范围宽，特异性强，重复性和稳定性好。 关键词： 苏云金芽孢杆菌；时间分辨免疫分析；单链抗体；多克隆抗体 中图分类号： Q78 文献标识码：A 文章编号： 1000~40(2013)01-0184-05 Developmentand evaluation ofadouble—antibody sandwich time-resolved fluoroimmunoassay(TRFIA)fordetection ofCrylB xu Chong—xin ， CHEN Sha-sha ， ZHANG Xiao ， LIU Yuan ， ZHANG Cun．zheng ， HUANG Ying ， LIUXian-jin ‘ (1．JiangsuKeyLaboratoryforMicrobesandGenomics，SchoolofLifeScience，NanjingNormalUniversity，Nanfing210046，China；2．InstituteD，Food QualitySafetyandDetection，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences／KeyLaboratoryofControlTechnologyandStandardforAgro-productSafetyand Quaiity，MinistryofAgncuhMre，Nanfing210014，China) Abstract： Anindirectsandwichtime—resolvedfluoroimmunoassay (TRFIA)forquantitativedeterminationofCrylB toxicproteinwasestablishedbyusing，aEu—N1clelateasatracernadsolublenati—CrylB singlechain—variablefragments (scFvs)ascaptureantibodyandant