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基于正交光路系统的小型流式细胞仪的研究 叶晓兰，杜文斌，古淑青，潘建章，祝莹，方群。 (浙江大学化学系，微分析系统研究所，杭州310058) 摘要：丰文舟绍7一种自制的结构简单、操作简便的小型流式妇胞分析系 统，谊仪器基于正交型光路系统，在微流控芯片上同时实现荧光微球数目和爱 光信号的拴剥。系统采用半导体激光器扫集成化光电倍增管等小型部件n减小 系统体积。使用6邮的荧光微卑作为拴刹样品初步考察系统的分析性能。 关键词：微流控芯片；正交光路系统；流式细胞分析系统 流式细胞杖是以流式细胞术为基础建立起来 ㈣15 ㈣25 (长度x宽度x高度)。激光光源采 的分析仪器，通过使细胞或微粒在液流中排列成 单列，逐个通过检测医．用高灵敏度检测嚣测定 散射光及各种荧光信号，从而获得其大小、形状 8 和成分等物理化学特性。在生物学、免疫学、遗传 学、血液学、临床检验等领域获得了广泛的应用。 但是，传统的流式细胞仪现虽已实现商品化，但 轧E 。1=僵、一 仍存在仪器体积大、结构复杂、造价高等局限性。 微流控技术是在微米级结构中操控纳升至皮 升级流体的技术与科学。在微流控芯片微米缴通 道随珞中，较易实现尺度相似的单个细胞进样与 图1流式细胞分析系统光路离… 控制。因此，微流控芯片用于细胞分析是近年来 i一半导体激光器；2一窄带滤光片，3一聚光透镜，4一傲 的谈技术发展的热点之一”2。本文基于正交光路 a道；5一芯片侧墅；6一撒光束；7一光电=级管；8一荧 光，9一检测目镜；10一针孔滤渡器；】I一窄带滤光片；12 模式。研制了小型化的流式细胞分析系统，该系 一集成化微型光电倍增管 统具有试样的消耗量低(每次只需使用几十微升)、 仪器结构简单、体积小、价格低廉等优点。 小型流式细胞分析系统由微流控芯片，光源， 光路系统，检测系统组成，结构如图l所示。微流 控芯片采用标准的紫外光刻、湿法女I蚀和低温键 台技术加工，微通道探20脚，宽70肿，构型如 囝2芯片结摘示意图 图2。 2E03年，富景秫等首次提出应用于微流控芯技发展有限公司)，发出的绿光经窄带滤光片滤 片的正交光路激光诱导荧光检测模式”‘。。后将其 光，由透镜聚焦，从垂直苗片平面的方向近距离 应用于微流控芯片流式细胞分析系统中，有效地 ^射副芯片微通道内。在激光出射方向上放置光 电二级管OlaFl01，检测前向散射光信号，从而对 简化丁系统结构8j。在本工作中，采用小体积激光 微球的数目进行测定。在与激光束垂直的平面内， 光源和光电倍增管，进一步减小系统体积至19栅 -基主事目：国家自然科学基金、教育部新世纪优秀^才支持计划(NcⅡ埘_0511)项目资助 d…n；皂话：∽】删H姗 通讯作者：方群．E-nxAi／：哳舯@qu 第26卷增刊 分析试验室 V01．26．Suppl． 2007年10月 Chinese．JournalofAnalysislJaboratory 20Cr7—10 在45。方向上，用目镜收集经芯片侧壁出射的荧光 参考文献 信号，经针孔滤波器滤波，窄带滤光片滤光后，由 [1]高健，殷学锋，方肇伦．化学进展，2004，16(6)：