《生物技术实践》复习试卷.pptxVIP

微生物的分离和培养 酶的研究与应用 DNA和蛋白质技术 生物技术与实践 一、微生物的培养与分离 ㈠ 微生物的培养与分离 培养基的配制 微生物的分离——纯化大肠杆菌的操作 ㈡ 某种微生物数量的测定 土壤中分解尿素细菌的分离与计数 ㈢ 培养基对微生物的选择作用 分解纤维素的微生物的分离 ㈣ 利用微生物进行发酵来生产特定的产物 果酒、果醋、腐乳的制作 ㈤ 发酵过程中亚硝酸盐含量的测定 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 ㈠ 微生物的培养： 1.培养基 培养基的种类 依据物理性质、化学成分、用途划分 培养基的营养 碳源、氮源、水、无机盐 配制培养基的操作： 倒平板与平板倒置 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算（配方比例） 称量（各种成分） 溶化（琼脂） 调整pH 灭菌 倒平板 ① ② ③ ④ 2.灭菌与消毒方法及对象 灭菌方法： 灼烧、干热、高压蒸汽、过滤灭菌法 灭菌对象： 培养基、培养皿、接种用具等 消毒方法： 煮沸消毒、巴氏、酒精、过氧乙酸、紫外线 消毒的对象： 操作台、操作空间、操作者的衣着和双手 3.接种 纯化大肠杆菌的操作—⑴平板划线法 平板划线操作 五区划线法 倒置培养皿 ⑵　稀释涂布平板法 ①　系列稀释操作 ②涂布平板操作： 4. 培养——恒温培养箱 培养：放在培养箱中，适宜恒温、氧气、二氧化碳的含量 5. 观察——菌落： 菌落群体结构特征： 菌落的形状、大小、边缘、光泽度、隆起度、透明度等 是菌种鉴定重要依据 菌落的观察 二、某种微生物数量的测定： ——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 选择菌种 梯度稀释培养菌液 稀释涂布接种 4.统计菌落数目： 样品稀释度足够高时，一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌（不是绝对的）。 实验至少要涂布三个平板作为重复组 一般选择菌落数在30～300的平板计数 每克样品中的菌落数＝ 平均菌落数÷稀释液的体积×稀释的倍数 稀释涂布平板法 鉴别培养基—固体 选择培养基—液体 三、培养基对微生物的选择作用 ——分解纤维素微生物的分离 四、利用微生物进行发酵来生产特定的产物 ㈠果酒和果醋的制作 果酒 果醋 实验原理 酵母菌无氧分解葡萄糖产生酒精 醋酸杆菌有氧分解葡萄糖、乙醇产生醋酸 实验设计操作过程 挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→→醋酸发酵 无氧↓1-3周 ↓有氧10天左右 生成果酒 生成果醋 结果评价 成分鉴定 3mol/LH2SO4 3滴、饱和重铬酸钾溶液3滴，酒精与重铬酸钾反应呈现灰绿色或通过嗅味和品尝 观察菌膜、嗅味、品尝，检测和比较醋酸发酵前后的pH、显微镜观察。 ㈡腐乳的制作 １.实验原理 用豆腐由多种微生物（主要毛霉）参与发酵制成 毛霉等微生物产生的以蛋白酶为主各种酶 发酵的最佳温度为15～18 ℃ 。 2. 操作条件 酒精含量的控制： 盐的浓度控制: 水分保持在70%以下 3.实验设计及操作 ４. 课题成果评价 是否完成腐乳的制作 腐乳质量的评价 影响腐乳质量的因素： 菌种和杂菌：杂菌污染则直接影响产品的色、香、味。 温度：温度影响菌丝的生长和代谢 发酵时间：发酵时间影响生化反应度及生化产物的量 调味品：各种酒类、糖类等辅料的多少也对口感有重要影响 五、泡菜中亚硝酸盐 含量的测定 1. 实验原理： 乳酸菌无氧条件将葡萄糖分解成乳酸。泡菜中微生物将蔬菜中硝酸盐还原成亚硝酸盐，亚硝酸盐在特定的条件下会转变成致癌物——亚硝胺。 用对氨基苯磺酸重氮法测量亚硝酸盐含量（紫红色）：在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸形成重氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺偶合，形成紫红色染料与标准显色液比较、定量分析。 2. 操作步骤 腌制泡菜 ↓ 制备标准显色液 ↓ 制备样品处理液 ↓ 比色→结果分析计算 腌制条件的控制 将坛口用水封好，防止外界空气进入 坛中要加一些白酒（白酒可抑制泡菜表面杂菌的生长，是一种调味剂，可增加醇香感） 腌制条件的控制：温度、食盐量、腌制时间 温度过高、食盐用量不足10％、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。 ３、亚硝酸盐含量的测定 制备样液 显色处理 标准比色 泡菜亚硝酸盐含量（mg/kg）= 　　　 样品亚硝酸盐含量 　　　取样量（40ml滤液） 比色亚硝酸含量单位：1μg= 10-3mg 取样量：0.4×1/2×60/500×40/100 = 9.6×10-3kg 泡菜亚硝酸盐含量的计算 观察样品颜色的变化，并与标准显色液比较，找出与标准液最相近的颜色，记录对应的亚硝酸钠含量，并计算。每隔2天测一次，将结果记录下来。 4.实验结果分析 1号坛 2号坛 3号坛 1月4日 0.15 0