平面波导型荧光免疫传感器的开发与测试.pdf

平面波导型荧光免疫传感器的开发与测试 宋保栋施汉昌何苗 清华大学环境科学与工程系 环境模拟与污染控制国家重点联合实验室 北京 100084 摘要：本研究开发了一套可用于免疫检测的基于全内反射荧光原理的传感器及检测系统。系统采用长 波长的荧光染料cy5．5，并用半导体激光器或者氦氖激光器作为激发光源，结合流动注射分析系统，使其能 够对传感元件上发生的免癌反应进行实时监测。本文主要介绍了平面波导型荧光免疫传感器的检浸4原理、 系统结构设计、系统测试结果等，实验结果表明，系统对荧光染料有线性响应，响应灵敏度：达到logmol／L。 关键宇：平面波导型荧光免疫传感器流动注射系统氦氖激光器免疫反应 20世纪60年代以来，免疫分析技术开始引入到环境检测领域中【l】，它利用有机污染物质与其特异性抗 体的亲和反应，并通过测定标记物(如放射性同位素、酶等)来表征环境中有机污染物质的含量。免疫传感器 技术结合了免疫分析与光学生物传感器的优点，有良好的特异性和较低的检测限【2】，与其他技术相比，对仪 器设备的要求低，操作简单，分析速度快。本文介绍的平面波导性荧光免疫传感器是本实验室自主研发的二 种光学免疫传感器，相对于其他类型的免疫传感器，它具有一些明显的优点：(1)抗电磁干扰；(2)光学信号 相对稳定；(3)灵敏度更高；(4)具有进一步实现在线监测的良好条件【3J。本文主要讨论了平面波导型荧光免疫 传感器的传感原理、传感器结构的设计和传感器系统的测试。 1．基本原理 采用光学传感器来检测环境污染物，检测的是识别分子和目标物相互作用而引起的光学特性变化，如生 成荧光或发光产物、因分子结合而发荧光或荧光淬灭、折射率或吸收光谱发生的变化等。本传感器的原理是 运用瞬逝波激发荧光染料，检测产生的荧光信号。 瞬逝波激发荧光原理： 基于全内反射(TI】黔原理，光从波导进入折射率低的非电导介质时，当入射角0大于临界角0。时，所有 的光将全部反射回波导中(咒。。删。胛删。)，疗。。。试曲、，z删。分别是波导层和介质的折射率，护。定义为： ’岫in’1(鼍] 在全内反射的条件下，横向电场与横向磁场的Fresnel传递系数不为零。这说明虽然光能全部被反射， 但电磁场从界面延伸到了低折射率介质中。该电磁场(瞬逝场)从界面向外随距离成指数衰减，延伸距离约 折射率、入射角和波长的函数： dp：嘉k哪；如)sinz0-(F／medium)2r 式中：A是入射波的波长，0是入射光与法线间夹角【4’s】。位于瞬逝波穿透深度范围内的荧光分子能够 被瞬逝波激发并产生荧光，通过检测荧光信号可以得到波导界面的物质信息。 2．设计与基本构造 2．1传感元件 平面波导型荧光免疫传感器的传感元件是具有一定结构的玻璃片，如图1所示，其尺寸为60mmX20mmX 456 2mm，玻璃片的一端有一个45度左右的斜面，用于激发光的导入，其上下底面和斜面要求具有很好的局部 光洁度和整体平面度；以保证激发光在玻璃片内部发生全反射时，不会有光折射出来形成干扰．传感元件的 下底面是传感面，需要对其进行化学修饰，修饰的目的包括两个方面：(1)让传感面含有一定量的活性基团(如 氨基、羧基等)，以用于共价固定生物分子，(2)降低免疫反应过程中非特异性吸附造成的假阳性影响。对于 玻璃片的修饰，一般利用其表面的羟基采用氨基硅烷化+高分子聚合物共价修饰法【6】。 ◆多波场 图1 平面波到型荧光免疫传感器的传感元件结构简图 2．2传感器基本结构 平面波导型荧光免疫传感器主要包括传感元件、反应池、激发光路和收集光路，同时还需要光电转换与 电信号处理、流动注射系统和信号采集及分析等部分构成完整的检测系统，如图2所示。其中传感元件、激 发和收集光路是整个传感器系统的核心，此部分实现免疫反应的进行、荧光染料的激发和荧光信号的收集及 滤波；流动注射系统可以实现系统的自动进样，并提高系统检测结果的重复性；光电转换与电信号处理部分 的作用是将收集的荧光转换成电信号，放大电信号，并过滤掉光电转换过程和信号放大过程中产生的噪音， 提高信号与待测物信息的相关性：信号采集及分析部分是将放大和过滤后的电信号数字化，进行计算机处理 和分析。 图2平面