异硫氰酸罗丹明B核壳荧光纳米颗粒的制备及其应用初探.pdfVIP

2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 异硫氰酸罗丹明B核壳荧光纳米颗粒的制备及其应用初探 黄 菊1，向 蓉1，李东辉+2 (1．厦门大学生命科学学院：2．厦门大学医学院抗癌研究中心。厦门361005) 荧光染料杂合的核壳荧光纳米颗粒的为生物医学领域的研究提供了新的荧光探针。传统的荧 光探针存在光漂白作用和可标记分子数有限等缺陷，影响了检测的稳定性与灵敏度。壳核包被的 纳米荧光材料以其荧光强度高，光稳定性好，表面易进行修饰，大小均一可调f]】等优点，越来越 受到广泛的关注。将有机染料以共价方式包埋在Si02中所得的复合材料具有独特的光学性质【21。 本文通过控制荧光团修饰的硅烷前体在反相胶束体系中的水解缩合，合成了可望用于生物检 测的高灵敏度、高稳定性的新型荧光团杂化纳米Si02颗粒．纳米颗粒中的荧光团以共价方式地包 裹在Si02网络结构中，不存在泄漏现象。与单个有机荧光探针相比，每个纳米颗粒中含有多个荧光 分子，发光强度大，光化学稳定性高。且其结构中带有游离氨基，可用于与生物分子偶连而实现队 生物分子的共价标记。 l实验部分 1．1试剂及仪器 (APTEOS)，实验室用水均为二次水。 PerkinElmer 计，超声波清洗器。 1．2实验部分 物干燥闭光反应24小时。反应产物离心后用无水乙醇洗涤，除去吡啶及末反应的单体，干燥备 用。 u 1．2．2壳核纳米颗粒的合成称取一定量的前体溶于o．IM的NaOH。取480l加入含环己烷 7．5ml，正己醇1．88m1，TfitonX．1001．77m1的圆底烧瓶中，待其形成均一的反相乳液溶液后，加 u 入40 粒。 1．2．3抗体与核壳荧光纳米颗粒的偶联采用戊二醛交联法，将4．2mg纳米颗粒分散在含有5％戊 二醛的磷酸生理盐水缓冲液中反应1小时。反应的纳米颗粒离心后重新分散在PBS中，加入一 蛋白。 1．2．4夹心型荧光免疫分析方法参考文献13】o以荧光分光光度计进行荧光检测。 新世纪优秀人才支持计划项目 ·通讯联系人 210 2006年I1月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 2结果和讨论 2．1纳米颗粒所带游离氨基的检测 采用茚三酮法，反应产物呈蓝紫色，表明所合成的纳米颗粒带有氨基。 2．2电镜表征 如图1所示，所合成的纳米颗粒大小基本一致，分散性良好。 2．3纳米颗粒包埋的荧光分子数的估测 在560nm下测定四甲基异硫氰酸罗丹明的吸光度值，绘制标 准曲线。再测出一定量的四甲基异硫氰酸罗丹明纳米颗粒在560nm 的吸光度值，并利用二氧化硅的密度及纳米粒子的粒径，求出一个 纳米可以大约包有1380个四甲基异硫氰酸罗丹明分子。 2．4夹心型荧光免疫分析 我们采用夹心免疫分析法，对所获得的纳米粒子在荧光免疫分 析中的可行性进行了初步探索。观察到在目前条件下，标记有此种 nuo，。磊。nt。ili。。n。品Darticle 纳米荧光粒子的人IgG对羊抗人IgG的最低响应浓度为 0．044p．g／mL，而其线性响应行为不甚理想。表明此种纳米荧光粒子如欲应用于定量免疫分析，尚 需进一步研究，以提高检测灵敏度与线性响应行为。 本实验中合成的纳米颗粒大小均一，分散性良好，而且表面修饰了氨基，易与生物分子直接 相连，除去了有些纳米荧光材料需进一步修饰基团的麻烦。所用罗丹明化合物虽然荧光产率虽不 如荧光素，但其发射波长较长，利于减小样品背景背景荧光及散射光的干扰【41。我们认为，在对 制各方法、标记技术、生化反应条件作进一步深入研究后，罗丹明杂化的纳米荧光粒子有望成为 一种具有实用价值的纳米荧光探针。 参考文献： Zhao，Rahul Tan．Adv．Mater,16(2)：173·176． [1】Xiaojun PBagwe，Weihong [2]WeiYang，Chang-gongZhang，Hui—yingQu，Huang-haoYang，Jin—gou 63-169． 503(2)：