抗艾滋病毒海洋微生物的筛选及其活性化合物的初步分离.pdf

福毽覆n 甍三鑫海洋鲁技术论蠡 2005．08．19．23 抗艾滋病毒海洋微生物的筛选及其活性化合物的初步分离+ 曾润颖、林昱+ (国家海洋局第三海洋研究所，厦门 361005) 乔文涛、陈启民 (南开大学生命科学学院，天津300072) 摘要：本文采用抗艾滋病药物筛选新模型(BIV模型)筛选了170株海洋微生物，得到4株有 活性的菌株。同样用BIV模型对它们的活性化合物进行活性跟踪分离，其中3株的初步分离 物通过抗HIV一1型病毒试验验证，确认确实具有抗HIV一1的活性。并对其中之一进一步分离 提纯其活性化合物。 关键词：抗爱滋病毒新药BIV海洋微生物 海洋微生物种类繁多，是海洋新药最有潜力的资源。而且微生物易用于工业化生产，这 是其他海洋生物所不可比拟的。尤其是大洋和生活在低温、高温、高压或其他极端环境下的 极端微生物，它们某些特异的细胞成分和代谢产物，更是值得探索的独特的药物资源。目前 已是美国、欧盟等新药研制强国刚刚涉足开发新药的领域，同样也应该是用以开发获得我国 自主知识产权的新药的宝贵资源。111 虽然有多种治疗艾滋病的药物，但由于其价格昂贵，且无特效药物，致使艾滋病患者难 逃悲惨命运和艾滋病迅速蔓延的一个重要原因。我国是艾滋病多发的国家之一，目前艾滋病 毒携带者达84万人，并且以高寸-刖：界平均增长速度增加艾滋病毒感染者。研发抗艾滋病的有 效药物是全世界更是我国的紧迫要求。埋1 1材料与方法 1．1筛选用菌株近海和大洋的细菌、放线菌、真菌等170株。 Virus，BIV)模型(南开大学 1．2筛选模型采用牛免疫缺陷病毒(BovineImmunodeficiency 生命科学学院的专利，专利申请公开号：CNl206745A)。【31 1．2．1 Bovine 胞(Fetal Cell)。 Lung 1．2．2将BIV(R29，美国)感染的FBL细胞(BIVR29／FBL)与正常的FBL细胞按1：1混 合培养，使BIV大尾扩增。 1．2．3 首先测试各待测样本的细胞毒性，确定检测用样品浓度。实验以3～4x104个／孔的密度 将FBL铺于24孔板，24h后根据细胞生长状况及病毒合胞体形成情况，按合适比例加入病毒 +福建省自然科学基金资助项目(No．C0310029)和大洋协会DYl05．4．2—2项目资助 木通讯作者：林昱，!i卫Y丛sQa@脞b!i￡：墨!娶：!=i：翊 98 禳建霞门’ 第三蟊海洋毒技术论霞 2005．08．19．23 后观察合胞体形成和细胞情况。如发现合胞体明显少于负对照且细胞存活85％，为有一定活 性效果的样品。重复试验进行确认。 本研究筛选测试部分试验在南开大学相关实验室中完成。 1．3活性跟踪：将从抗艾滋病毒菌株分离纯化化合物，同样采用BIV模型进行活性跟踪。 1．4大孔吸附交换根据需要装填成不同大小的交换柱。大孔吸附树脂购自南开大学化工厂， 树脂需按产品要求进行洗涤再生活化后填柱。所用树脂型号、性能和规格见表1。 表1 大孔吸附树脂型号、性能和规格 The of Resin Tab．1 Adsorption type Macroporous 将从大洋中分离的170株菌株分别进行发酵培养，收集发酵液和湿菌体，湿菌体经超声波破 肇，得到菌体裂解液，将发酵液和菌体裂解液过柱，洗脱，浓缩，得到不同分离组分，作为待测样品， 进行抗艾滋病毒活性测定． 1．5体外抗艾滋病毒1型的测试测试是在中国医学科学院医药生物技术研究所进行。细胞 阳性对照I司时设病毒对照孔，每样平行测试3个孔，37。C培养至第6d，观察各孔出现的HIV一1 病毒引起的细胞融合特征性病变(SI)。并取各个平行样的各孔细胞悬液50p．1合并，用P24检 测试