沉底分离法重点.pptx

沉淀分离法 组员：李纳 林海棠 朱仲琳 刘钰 李琪 4.1 概述 沉淀分离：是一种经典的分离方法，沉淀分离法就是采用适当的措施改变溶液的理化参数，调控溶液中各种成分的溶解度，从而实目标产物于其他物质分离的技术。 优点： 1.原料易得、流程简单、成本低廉、便于小批量生产。 2.产物浓度越高沉淀越有效，收率越高。 缺点：所得产品纯度较低。 注意事项： 1.采用的分离条件，要选择适当的温度、酸碱度等，且沉淀反应必须是可逆的。 2.加入溶液的沉淀剂或其他物质要是容易得且在后续 精加工易除。 3.保证对环境无污染，对人体无毒害作用。 4.沉淀剂在待分离的溶液中要有适当的溶解度，且受温度影响应较小。 4.2 沉淀分离的理论基础 4.2.1 溶液的稳定性 沉淀分离的主要对象的表面有很多亲水集团和疏水基团，大多以胶体形式溶解在提取液或发酵液中，其长期保持稳定的原因有三个。 1.布朗运动：悬浮微粒不停地做无规则运动的现象，运动越激烈，胶体粒子越不易聚集沉淀。 2.静电斥力：由于胶体分子间的静电排斥作用，形成双电子层，当电子层达到一定程度时，两胶粒间静电斥力强于分子间的相互引力而使胶体处于稳定。 3.胶体水化层：当水分子与离子间的相互作用能大于水分子与水分子间的氢键能时，水的结构破坏并在离子周围形成水化层。胶体周围的水化层越厚，稳定性越大。 4.2.2 沉淀的原理 胶体虽具有聚集稳定性，当毕竟属于热力学不稳定体系。许多外部因素会破坏胶体的稳定性。 1. 温度、机械作用、化学作用等都可以破坏胶体的稳 定性。导致溶胶分散度降低，分散相颗粒变大，最后从介质中沉淀析出，这种现象称作聚成。 2. 电解质可以夺走水分子，破坏水化层，暴露疏水基团，从而使胶体沉淀。 3.外因逐渐中和了胶体电荷，使分散层厚度变小，导致紧密层电位降低，静电斥力逐渐减小，分子间相互吸引力加大甚至超越斥力，同时粒子间的布朗运动反而使其聚集沉淀。 4.3 常用沉淀分离技术 盐析沉淀法 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法 高分子聚合物沉淀法 复合盐沉淀法 4.3.1 盐析沉淀法 盐析沉淀法即在胶体溶液中加入电解质，使胶体微粒聚集，溶解度降低，而从溶液中沉淀出来的方法。 该方法适用于蛋白质的分离，可作为蛋白质的粗分离手段。 1、盐析原理 胶体分子的稳定性 胶体分子所带的亲水基团与水分子作用形成水化层，避免相互碰撞而聚集沉淀 内层极性基团使分子间相互排斥 向溶液中加入大量中性盐后： 中性盐破坏水膜，暴露疏水区域； 中和电荷，降低颗粒间排斥阻力。 胶体分子碰撞聚集，结合成聚集物而沉淀析出。 H+ OH- H+ OH- 中性盐 破坏水膜 2、盐析公式 在高浓度盐溶液中，溶质溶解度的对数值与溶液中的离子强度成线性关系。 lgS = β – Ks I S为蛋白质溶解度 β为盐浓度为0时，目的高分子溶解度的对数值 I为离子强度 3、常用盐析剂 Hofmeister 理论认为：半径小带电荷高的离子盐析作用较强，半径大带电荷低的离子盐析作用较弱。 常见阴离子的盐析作用顺序： PO43- SO42- CH3COO Cl NO3 ClO4 I SCN 一般盐析作用 阴离子阳离子 阳离子对盐析效果的影响： Al3+ H+ Ba2+ Sr2+ Ca2+ Cs+ Rb+ NH4+ K+ Na+ Li+ 4、影响盐析的因素 蛋白质种类 温度和pH值 离子类型 蛋白质原始浓度 盐的加入方法 （1）蛋白质种类 不同蛋白质的β 和Ks 值不同，相对分子质量大，结构不对称的蛋白质越容易沉淀。 （2）温度和pH值 在低离子强度溶液，蛋白质溶解度在一定范围内随温度升高而增加。 在高离子强度溶液，升高温度利于某些蛋白质失水，溶解度下降。所以一般盐析不降低温度。 在pH等于等电点的溶液中，蛋白质静电荷为零，静电斥力最小，溶解度最低。 （3）离子类型 相同离子浓度，盐种类的不同，其盐析效果也不同 （4）蛋白质的原始浓度 蛋白质浓度高时，盐的用量少。但原始浓度过高，溶液中的多种蛋白质会共沉，浓度过低则会消耗大量的中性盐，不利于回收。在进行盐析时要控制蛋白质的浓度在合理范围。 5、盐析沉淀法的操作步骤 蛋白质溶液冰水浴并搅拌 以蛋白质盐析沉淀为例： 边搅边加硫酸铵至饱和 继续搅拌 离心 弃去上清，沉淀溶解于1~2倍沉淀体积的缓冲液 离心 除去硫酸铵 6、盐析法的优缺点 优点： （1）室温下沉淀物在硫酸铵盐析溶液中长时间放置不会失活，且无机盐不容易引起蛋白质变性失活。 （2）非蛋白的杂质很少被夹带沉淀。 （3）适用范围广，几乎所