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Aptamer及其在核医学中的应用

学号单位:基础医学院 姓名:靳存敬 Aptamer 及其在核医学中的应用 Aptamer,源于拉定语aptus ,即配对、适应之意,指的是经过一种新 的体外筛选技术——指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX),从随机单链寡聚核苷酸文 库中得到的能特异结合蛋白质或其他小分子物质的单链寡聚核苷酸, 可以是RNA 也可以是DNA,长度一般为25~60 个核苷酸。与抗体类 似, 它与靶分子结合具有高特异性和高亲和力。 自从tuerkgold(1)等人在1990年研发SELEX以来,该项技术得 到长足的改进和发展,aptamer靶分子广、亲和力高、特异性强、易改 造修饰等特点令其在基础研究、临床诊断、药物研制方面得以广泛应 用。本文主要从SELEX方面介绍Aptamer,及其在核医学方面的应用 做综述。 一:SELEX筛选技术 基于进化的各种方案已经被应用于塑造核酸(核酶和 aptamers)或有特殊功能的蛋 白质。也许定向进化的最极端形式是 核酸的生命体外复制。其最早的体系是Spiegelman所做的Qβ基因 组在Qβ RNA-依赖的RNA聚合酶作用下的复制(Spiegelman et al. 1986)。Spiegelman在体外复制系统中没有让进化向着除了自我复 制以外的任一方向进行(2)。也许首次真正意义上的允许定向进 化的体外系统要数“指数富集的配体系统进化”。SELEX技术筛选 aptamer的过程包括以下几个方面: (附图) (1)异源寡核苷酸库 (上方的小波浪线)流经一列锚固的靶分子(深色椭圆)。所有 的寡核苷酸在末端都有相同的序列,但中部的序列不同。(2)其 序列有助于和目标分子成键的寡核苷酸变异体留在柱中,其它则 被冲走。(3)改变溶液的盐浓度或者pH值使成键的寡核苷酸被 洗脱下来。(4)第3步中的寡核苷酸经PCR扩增。(5)扩增后的 分子库再进入第一步进行循环。几次循环后,留下的寡核苷酸序 列基本上都可以与靶分子成键了 。 以往筛选一种靶分子的aptamer需要耗费几个月的时间。如今, SELEX 筛选过程已可以自动化,可在几周内筛选出针对多种靶分子的aptamer, 显著加快了筛选适配子的实验过程, 也可满足产业化的需要(3)。 由此可以看出Aptamer 的特性: 1 严格的识别能力和反应的特异性:与相应靶分子结合具有极高的亲 和力和特异性, 结合解离常数(Kd) 可达nmol/L甚至pmol/L水平, 这 些均可与广泛用于临床诊断和治疗的抗体相媲美; 2 与靶序列作用的广泛性:酶,生长因子、抗体、基因调节因子、细 胞牯附分子、植物凝集素、完整的病毒颗粒、病原菌等.金属离子.有 机染料、药物、氨基酸、辅因子 .氨基糖甙、抗生素、核苷碱基类 似物、核苷酸和肽等. 3 反应条件的可修饰性:易被体内的核酸酶所降解, 但各种核酸修饰 方法可使适配子在体内的半寿期大大延长, 稳定性增加 。进行修饰, 再选择,即为偏倚文库生成的aptamer优化(aptamer optimazation through biased library generation)。 4用于诊断试验的普遍性:酶标记,放射性标记.荧光标记与生物素 标记,流式细胞技术 ,传感器、荧光偏振,分子灯塔及毛细管电泳 等检测手段(4)。 二:核医学中的应用 根据aptamer所具有的生物学性质,在临床诊断和治疗方面其将成 为抗体的重要竞争对手,对反义寡核苷酸和核酶技术也是很大的挑 战。它的无序列依赖性,低免疫原性,靶分子的广泛性似乎都预示着 比单抗和寡核苷酸都有更广阔的应用前景。作为导向剂所需的所有特 性,其分子可以偶联核素,毒素等 ,并递送到靶组织,同时具有直接 抑制靶蛋白的功能,是非常有潜力的体内显像和治疗药物。 1, 用于肿瘤治疗和诊断 许多信号蛋白参与细胞 生长和分化,是肿瘤诊断和治疗的重要目 标。 肌腱蛋白(TN-C)水平升高是局部肿瘤复发的

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