RedDot復染远红光核特异性染料.docx

RedDot复染远红光核特异性染料RedDot?1 和 RedDot?2是两个远红光DNA结合染料，作为核复染剂，可分别用于活细胞或者固定细胞和通透性的细胞核染色。RedDot?染料结合现有核复染剂（如DAPI，Draq?5和 Draq?7）优势与其他关键性的优势于一体。其光谱相似于Draq?5 和Draq?7，RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。RedDot?的激发峰值可以有效的与其他常用荧光探针区分开来（图1），从而也使RedDot?染料成为多色成像的理想核复染剂。图1. 结合DNA的FITC，Cy?3和 RedDot?2各自的吸收和发射光谱。RedDot?1 和RedDot?2有相似的光谱。细胞通透性的RedDot?1可以快速有效的结合活细胞的核（图2）。细胞膜非透性的RedDot?2具有良好的死细胞选择性。图2. 活HeLa细胞被 1X RedDot?1染色示意图，37℃孵育5min。不像Draq?5和Draq?7，在通透性细胞中，如果没有额外的阻止处理步骤，细胞质也会被明显染色，RedDot?2是细胞核高度选择性染色。因此，RedDot?2是固定和通透性细胞的完美的核复染剂（图3）。图3. 甲醛固定和洗涤通透性的HeLa细胞，使用1X RedDot2（左图）及3uM Draq7（右图）在PBS中染色10分钟。RedDot2染色是细胞核高度选择性的，而Draq7染料将细胞核与细胞质一并染色，除非使用额外的阻止步骤处理。微丝染色使用CF488A鬼笔环肽（绿色）。 CF488A-GAR, CF555-GAM, CF405-phalloidin, RedDot2-icc CF568-GAM, CF488A-GAR,RedDot2-IHCRedDot?染料可用于贴壁或悬浮细胞以及组织切片的染色。高效耐热和耐光特性，提供了简便的步骤，更是条件要求苛刻的实验（如激光共聚焦显微镜检测）的理想选择。第2页列出了应用列表。显微镜观察RedDot?染料是优秀的核复染剂，其拥有高度的特异性，极好的耐光性及远红光激发（~680nm），其最大激发峰值可以有效的与其他常用荧光探针区分开来。该染料可以被几种激光射线激发，包括488，532，543，568，594，633，635和647 nm激发光线。这些特性使RedDot?染料成为免疫细胞化学研究和高通量筛选试验中有用工具。图3. 甲醛固定和洗涤通透性的HeLa细胞，使用1X RedDot2（左图）及3uM Draq7（右图）在PBS中染色10分钟。RedDot2染色是细胞核高度选择性的，而Draq7染料将细胞核与细胞质一并染色，除非使用额外的阻止步骤处理。微丝染色使用CF488A鬼笔环肽（绿色）。流式细胞仪RedDot?1染料可用于分析细胞周期分布。该可被一系列激光射线激发，包括488，532，543，568，594，633，635，640，647nm激发，在远红色通道的激发。图4. RedDot1用于细胞周期分布分析。活Jurkat细胞使用1X RedDot1在37℃染色30分钟，使用BD LSRII流式细胞仪633 nm处激发和710/50 BP排放过滤器。Philip Hexley的图像系统，Shriners核心流式细胞仪设施，来自Shriners儿童医院和Cincinnati大学。其他应用RedDot?染料可用于标准化或细胞计数，用荧光酶标仪或LI-COR Odyssey近红外系统在In-Cell Western?。图5 RedDot1染色HeLa细胞的细胞数量标准化。HeLa细胞接种在指定密度96孔板中。 24小时后，细胞是固定的，透性的，根据DRAQ5/Sapphire700供应商的协议，使用图中对应的染料室温下染色一小时。使用LI-COR Odyssey系统进行荧光定量。 HeLa细胞接种至每孔25,000细胞融合在检测点。RedDot?1, RedDot?2,和CF?染料是Biotium公司的注册商标; DRAQ5?和Draq7?是Biostatus Odyssey?, In Cell Western?的注册商标, Sapphire700?是Li-COR Biosciences公司的注册商标; Cy?3 和 Cy?5是GE医疗集团的商标。RedDot?1, 活细胞核染色; RedDot?2, 选择性标记死细胞，固定细胞及通透性细胞的最佳核复染剂。