果蔬中谷胱甘肽的毛细管电泳测定.pdf

果蔬中谷胱甘肽的毛细管电泳测定 黄颖1，2段建平3杨明灿2刘荔彬2陈国南1 (1，福州大学化学系，福州350002；2，福建师范大学化学系，福州350007： 3，福州大学中心实验室，福州350002) 摘要：采用毛细管区带电泳，以0．04mol／L的磷酸盐(PH7．32)为运行缓冲液，紫外检测器在波长200nm u u 条件下检测，建立了果蔬中谷胱甘肽(GSH)的毛细管电泳测定方法。结果表明：GSH在3 g／ml一307g／ml 范围内具有良好的线性关系，相关系数r=O．9995：方法最低检测质量浓度为1．54u g／ml，(S／N=3)。利 用该方法对黄瓜及西红柿中的谷胱甘肽进行了测定．GSH在西红柿中的加标回收率为，94．93％～101．4％，； 在黄瓜中的加标回收率为91．25％～99．36％．该方法具有快速、简便，灵敏，重现性好等特点． 关键词：谷胱甘肽；毛细管电泳；紫外检测；西红柿；黄瓜 谷胱甘肽是一种由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸构成的三肽化合物，在自然界以还原型(GSH) 和氧化型(GSSG)两种形式广泛存在于动植物和微生物体内，其中还原型为其主要形式，谷胱 甘肽参与多种代谢过程，在动植物体内表现出重要的生物学功能．例如，GSH具有防止因巯基氧 化而导致的蛋白质变性，消除自由基和解除外源性有毒物质的毒性等功能，因而在医学、食 品、保健、防衰老等方面均有重要作用。谷胱甘肽常用的测定方法有：荧光分析法幢1、高效液 相色谱法旧一1、毛细管电泳法…等．食品中的谷胱甘肽的测定常用化学法和酶法口3，它们耗时， 烦琐，用毛细管电泳法来测定食品中的谷胱甘肽尚未见报道。本文建立了果蔬中谷胱甘肽测 定的实验方法，结果表明：该方法具有高效、快速、简便、重现性好等特点，可用于其它果蔬样 品测定． 1实验部分 1．1仪器和试剂 Beckman 器有限公司)：KQ-100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。 谷胱甘肽标准品(纯度98％一100％)购于Sigma公司。磷酸氢二钠(分析纯)，磷酸二氢钠 (分析纯)，磺基水杨酸(分析纯)、MilliQ超纯水(美国Millipore公司)。 1．2样品制备 精确称取洗净并已捣成均浆的黄瓜和西红柿样品12．09和10．09，加入适量的磺基水杨 酸(按样品质量／磺基水杨酸质量为200：1)，用超纯水定容至25．Oml，再用微孔滤膜滤得清 液供实验所用。 1．3分离分析 每天实验前分别用0．1mol／L 为保证重现性良好，每次进样间用分离缓冲液冲洗3min。采用压力进样(0．5psi、lOsec)、 2结果与讨论 2．1CE条件的优化 冲液时对灵敏度的影响。结果表明，采用磷酸盐缓冲液基线较为平直，背景噪声最小。在选 抒分离电压时，较高的分离电压可以使GSH的迁移时间缩短，但电压太高将导致焦耳热效应， 通过研究电流(I)一电压(V)曲线，当电压高于25KV时，I-v曲线将偏离线性，故本实验选 择25KV为分离电压。另外通过比较GSH在不同pH的磷酸盐缓冲液中的迁移行为，发现当pH 为7．32时，峰形较为对称。在上述条件下，样品中的GSH得以与其它组分分离(图略)。 2．2方法的准确度 取黄瓜和西红柿12．09和10．09，加入一定量的GSH标准液，按样品的预处理方法进行处 理，用毛细管区带电泳分析，计算加标回收率。实验结果见表l。 表1黄瓜和西缸柿回收率测定结果 2．3方法的精密度 取西红柿和黄瓜样品，按上述方法各平行测定5次，其结果见表2。由表2的数据可看出， 用该方法测定果蔬中的GSH，具有良好的重现性，其RSD不大于3％。 表2黄瓜和西红柿的精密度测定结果 2．4GSH的工作曲线和线性范围 ll u g／m1)呈线性关系，回 谷胱甘肽在3 g／ml时峰