核糖体RNA基因间隔区鉴定病原微生物的方法学研究.pdf

核糖体RNA基因间隔区鉴定病原微生物的方法学研究 鲁辛辛·黄艳飞 田晓波 (北京同仁医院检验科100730) rRNA 【摘要】目的细菌16S-23S ISR(intergenicspacerregions，基因间隔区)、真菌18S ．5．8SrRNAITS(internaltranscribed spacer，基因转录间隔区)在病原微生物分子鉴定和分 类与耐药基因同步检测的技术问题。方法核糖体基因间隔区指纹鉴定和直接测序的微生物 分类技术；鉴定与耐药基因同步检测的多重PCR技术路径；改进不同环境中微生物DNA提 取方法。结果细菌与真菌因属或种的不同具有独特的基因间隔区指纹，在分析软件指导下 可以进行初步的微生物鉴定和亲缘关系研究，也可经测序确定微生物种或型。多重PCR实 间隔区与TEM和SHV基因同步检测问题，并建立了原生态标本中高品质微生物DNA提取 rRNA 方法。结论16S．23SrRNAISR和18S一5．8SITS指纹可以作为病原微生物分子诊断的 指标，在分类学上有较高的应用价值。原始标本中未知微生物的分子鉴定取决原核生物DNA 质量。多重PCR为解决微生物分类与耐药基因同步检测提供了良好的技术平台。 【关键词】 微生物；核糖体RNA；分类：方法学 A molecular onthe and techniquepathogenicmicroorganismsgenus Rapid taxonomy RNA ofbacteriaand LU ribosomal Xinxin， speciesby intergenicspacerregions fungi of HUANG xiaobo．Medical Yanfei，TIAN LaboratoryBeijingTongrenHospital，lDongjiao Mingxiangstreet，DongChengregion，Beijing，100730，China To a methodto classification rapid usingmicroorganismsby [Abstract]Objectiveexplore 16S一23SrRNA 8S一5．8SrRNAinternaltranscribed bacteria,1 intergenicspacerregionsOSR)in the from todetectdifferent rRNAandantibioticresistance spacer(ITS)infungi，and targets genes with PCR．MethodsThe rDNAISRafter multiplex electrophoresesfingerprinting，directsequence PCRfor identifi