核糖核酸与酚藏花红作用机理及含量测定.pdf

1月 湖北·武汉 2006年I 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 核糖核酸与酚藏花红作用机理及含量测定 訾言勤，陆丽园，张东辉，赵丹华，李春晓 (淮北煤炭师范学院化学系，安徽淮北235000) 摘要：在弱碱性介质中，小分子酚藏花红与生物大分子核糖核酸(RNA)强烈相互作用，导 致分子构象的变化，起分子光谱最大吸收波长和吸收值的变化。研究了反应体系酸度、酚藏花红 用量、反应时间等影响反应速度的因素，确定了最佳实验条件，建立了测定核糖核酸的新方法。 线性范围为2．0～14．0 mg／L，相关系数为O．9966。对作用机理进行了初步探讨，静电缔合作用使 酚藏花红分子与凝聚在RNA分子链上的反离子交换，然后，以协同方式与RNA分子发生键合， 使酚藏花红的丌．电子叠合程度降低，颜色变浅，吸收值降低，最大吸收波长紫移。 关键词；核糖核酸；酚藏花红；分光光度法；静电缔合 1实验部分 1．1仪器与试剂 海第二分析仪器厂)；生物显微镜(江南光学仪器厂)。核糖核酸标准溶液：准确称取50mg核糖核酸 固体(中国医药集团上海化学试剂公司)，用去离子水溶解稀释，定容于500mL容量瓶中，其质量 浓度为100 me／L：酚藏花红溶液：准确称取50mg酚藏花红固体，用去离子水溶解稀释定容于250 mL的容量瓶中，其质量度为200 酸、乙酸、硼酸，浓度均为0．04 mol／L)中，加入0．2mol／L的NaOH溶液调整所需pH，用酸度计测定； 所用试剂均为分析纯或优级纯，实验用水为去离子水。 1．2实验方法 酚藏花红溶液1．0mL和RNA标 在10mL的比色管中依次)3122＼pH为7．6的B-R缓冲溶液2．0mL， 准溶液1．0mL，稀释至刻度，摇匀，放置5min后，以水为参比，TU．1901双光束紫外可见分光 光度计扫描吸收光谱，并测定530 nm处样品溶液吸光觑，同时做试剂空白，吸光度值为Ao，并 计算吸光度差值AA=(Ao--A)。 2结果与讨论 2．1介质种类、缓冲体系和酸度对作用的影响 分别用磷酸盐、硼酸盐和伯瑞坦-罗比森(B-R)缓冲溶液对体系进行实验，表明在B．R缓冲溶 液中酚藏花红和RNA作用显著，故实验中选择B．R缓冲溶体系。在pH4．O～10．0范围内，当pH 2．2酚藏花红用量和反应时间的影响 在同条件下，酚藏花红溶液用量为1．0mL时△A最大．将实验溶液和空白溶液分别在530nm 处进行时间扫描，酚藏花红与RNA反应瞬问完成，且吸收强度在lh内保持稳定；而空白溶液吸 224 2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 验产生的影响不大，可先放置5min，然后进行测定。 2．3试剂加入顺序和强电解质的影响 分析试验了不同的试剂加入顺序(缓冲溶液、酚藏花红、RNA：酚藏花红、缓冲溶液、RNA 及RNA、酚藏花红，缓冲溶液共有六种不同的滴加顺序)对体系的影响，实验表明试剂加入顺序 对吸光度的影响。实验证明，体系的吸收强度差受离子强度的影响同样不大，离子强度的增加对 酚藏花红与RNA的结合几乎无影响。表明在弱碱性介质中质子化的酚藏花红与带负电荷RNA不 是发生静电吸附作用，而是静电缔合聚集作用。 2．4干扰实验 当RNA含量5m叽，相对标准偏差在±5％范围内，研究了下列可能共存的生物大分子以及 ca2’、Fe3十、K+等金属离子对体系的影响，它们的最大允许浓度分别为：溶菌酶(O．5 me／L)、 DNA(0．6mgdL)、胃蛋白酶(4．0mg／L)、牛血清蛋白(2．2mgrL)、CaH(5．0mg／L)、Fe(3．5re#L)、 NaCI介质中溶解度很低而RNA