桃AFLP技术体系的建立及银染检测技术.pdf

果树1的 桃AFLP技术体系的建立及银染检测技术 吴俊1柬怀瑞2张开春3 (1南京农业大学园艺学院，江苏南京210095；2山东农业大学园艺学院， 山东泰安271018；3北京市农林科学院林业果树研究所，北京100093) 摘要：以桃叶片为研究试材，建立了一套稳定、高效的AFLP分析体系。制备高质量的 基因组DNA，预扩增及选择性扩增模板的适宜浓度、引物组合的选择，银染显色中的洗胶与 显色环节是影响分析结果的重要因素。 关键词：桃；AFLP分析；银染 this stableand efficientAFLP of Abstract：In paper，the high analysissystempeachge- nomeDNAwas of DNA【suitable for established．Highqualitygenome templatedensitypre— andselective of combinationfor amplification amplification，selectionprimers preamplifieation andselective and in were fac— amplification，rinsedevelopmentstepsilver-stainingimportant torswhichaffectedresultsofAFLP． Keywords：peach；AFLPanalysis；silver-staining 了PCR技术的高效性与RFLP的准确性的双重优点，巧妙的引物设计使得少数引物的多种组合即可获 得大量的遗传信息。通过一些实验室和科学家的使用和验汪，AFLP被认为是一种十分理想、高效的分 子标记。目前该技术已广泛的应用到作物研究中，如水稻口]、大豆口]、黑麦[41等；在猕猴桃口]、芒 果[6]、葡萄[“、柿[“、苹果[”等果树上也有应用。从以往的研究报道来看多数是采用AFLP分析试剂 盒，检测手段多采用放射性标记，费用昂贵。本文试图根据AFLP的基本原理合成扩增引物并采用银 染检测方法，建立一套适合于桃基因组AFLP分析的技术体系，降低实验成本，以期达到加快推广应 用的目的。 1材料与方法 1．1材料 以京玉、美味及其杂交F-群体为研究试材。 1．2方法 收稿日期：2006—04—26；修回日期：2006—05’09。 基金项目：北京科技合同项目(954830300)，北京市新星项目(953812200)资助。 作者简介：吴俊．女，1975年生，博士，主要从事果树生物学研究。现工作单位：南京农业大学园艺学院．邮编：210095 jall@sohmcorn)。 (E-mail：wudun 200园艺学进展C第七辑 戊醇、氯仿一异戊醇多次抽提，经紫外分光光度计和0．7蹦的琼脂糖凝胶检测合格后，将样品DNA浓度 调至50ng／pl。 core kit 1．2．2酶切连接酶切连接反应采用的是Lifetechnolc-gies公司的AFLPreagent Buffer 2．5p1，加水至12．5tzl。37℃保存过夜， p1)5p1，EcoRI／MseI(1．25U／,u1)1．op_l，5XReaction 酶切后的DNA样品置于70℃保温15rain。 在酶切反应液中加人接头连接液[EcoRI／MseI