桃果实PpEIN2基因片段的克隆及序列分析.pdf

果树255 桃果实PpEIN2基因片段的克隆及序列分析 魏绍冲1王新春2彭静1孙旭东1 (1山东农业大学园艺科学与工程学院，泰安271018 2山东农业大学食品科学与工程学院，泰安271018) 摘要：以成熟肥城桃果实的eDNA为模板，根据其他植物EIN2氨基酸和核苷酸的保守 103 区设计简并引物，通过PCR扩增出1个1bp大小的基因片段。根据测序获得的序列设计 的特异引物P3和P4分别与B26进行巢式PCR扩增，得到了该基因下游的一个1106bp大小 112 的基因序列。两个片段拼接后的序列PpEIN2基因片段大小为2 bp，3-端非编码区(3，_ UTR)为249 bp，编码区为1860bp，编码620个氨基酸。经同源性分析，该序列与拟南芥、 水稻、玉米等植物的核苷酸的同源性达51．o蹦～66．4％，氨基酸的同源性为45．0％～60．4％。 关键词：桃；EIN2；基因克隆}序列分析 totheconservedaminoacidandnudelcacid fromEIN2 Abstract：According sequence gene inother of was anda1103 cDNA was plants，apairdegenerateprimersdesigned bp fragment RT-PCRfrom a1106 fruit，then eDNA wasobtained amplifiedby ripeningpeach bp fragment 31RACE．A2 112 cDNA obtainedfromthetWO by fragment，named hp PpEIN2，was frag— encoded620aminoacidsandits shared atbothmac- sequences ment．PpEIN2 highsimilarity with leotideand 1evel the fromthe of polypeptide sequences plantsArabidopsis，tomato， and maize，ricepetunia． Keywords：peach；EIN2；cloning；sequenceanalysis 乙烯是五大类植物激素之一，作为一种内源性调节因子在植物生长发育过程中起着重要作用。它对 植物生长发育的许多过程如种子萌发、幼苗生长、开花、结实、果实成熟和衰老等有着广泛而深远的 影响‘1～3。+ ．乙烯的生理作用最终是通过其信号转导途径实现的。借助拟南芥突变体三重反应(黑暗条件下双子 叶植物幼苗所发生的表型变化)等手段，建立了乙烯信号转导的基本轮廓[4]：乙烯一乙烯受体-*CTRl (RNA 乙烯的敏感性下降，主要表现为：花的衰老明显延迟，不定根的生成受到抑制，可见EIN2在植物发育 中也分离了EIN2的同源基因。 金勇丰等041先后克隆得到了桃ACC合酶和ACC氧化酶基因，国外已分离了桃乙烯受体编码基