第2章核酸的结构与功能讲义.ppt

DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相当于 50μg/ml 双链DNA(dsDNA) 40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 确定样品中核酸的纯度 纯 DNA: A260/A280 = 1.8 纯 RNA: A260/A280 = 2.0 紫外吸收的应用 二、DNA变性是双链解离为单链的过程 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 定义 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。 协同性的DNA解链 高温或极端的pH DNA的变性 部分变性DNA的电镜图像 增色效应(hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 DNA解链时的紫外吸收变化 DNA的解链曲线 连续加热DNA的过程中以温度相对于A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 在DNA热变性过程中，50%的DNA分子发生变性时，所需要的温度称为解链温度。 Tm在融解曲线上指紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度。 解链温度(melting temperature，Tm) G+C 含量越高，解链温度就越高。 解链曲线的变化 三、变性的核酸可以复性或形成杂交双链 当变性条件缓慢地除去后，两条解离的互补链可重新配对，恢复原来的双螺旋结构，这一现象称为DNA复性(renaturation) 。 减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)。 这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 核酸分子杂交(hybridization) 核酸分子杂交 研究DNA分子中某一种基因的位置。 监定两种核酸分子间的序列相似性。 检测某些专一序列在待检样品中存在与否。 核酸分子杂交的应用 * * * * * The forces stabilizing the DNA double helix can be overcome by heating the DNA in solution or by treating it with very high or very low pH (low pH will also damage the DNA, whereas high pH will simply separate the polynucleotide chains). When the strands of DNA separate, the DNA is said to be denatured (when high temperature is used to denature DNA, the DNA is said to be melted). Because some of the forces stabilizing the DNA double helix are contributed by base pairing interactions, and because A-T base pairs have only two hydrogen bonds in contrast to G-C base pairs which have three hydrogen bonds, regions of the DNA duplex that are A-T rich will denature first. Once denaturation has begun, there is a cooperative unwinding of the double helix that ultimately results in complete strand separation. DNA经过多次折叠，被压缩了8000～10000倍，组装在直径只有为数微米的细胞核内。 真核生物的染色体 噬菌体T2结构 头部 颈圈 尾部 基板 尾丝 尖钉 DNA 动物病毒切面模式图 被膜（脂蛋白、碳水化合物） 衣壳（蛋白质） 核酸 突起（糖蛋白） 病毒粒 （DNA或RNA） DNA的基本功能是以基因的形式荷载遗传信息，并作为基因复制和转录的模板。它是生命遗传的物质基础，也是个体生命活动的信息基础。 基因从结构上定义，是指DNA分子中的特定区段，其中的核苷酸排列顺序决定了基因的功能。 （三）、DNA是遗传信息的物质基础 R