姜黄素在小鼠肝泡状棘球蚴中对TNF―α和TNF―β的影响.docVIP

姜黄素在小鼠肝泡状棘球蚴中对TNF―α和TNF―β的影响 　　摘要：目的 初步探讨姜黄素在小鼠肝泡状棘球蚴生长发育过程中对TNF-α和TNF-β的影响。 方法 选取132只18w龄健康雌性昆明小鼠，随机分为6组（n=22）：姜黄素组、姜黄素溶剂注射组、阿苯达唑组、姜黄素+阿苯达唑联合用药组、模型对照组、空白对照组。除空白对照组外，其余各组小鼠均采用20%乌拉坦腹腔注射麻醉后，切开皮肤经腹壁肌层肝穿刺对肝脏注射0.1mlE.m组织混悬液，制备小鼠肝泡状棘球蚴模型，空白对照组注射等量的生理盐水。接种60d后再灌胃饲养60d，然后提取各组小鼠血清采用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清中TNF-α和TNF-β的含量。结果 感染了E.m的小鼠血清中TNF-α、TNF-β的表达量明显高于空白组（P0.05）。结论 姜黄素可以使肝泡状棘球蚴模型小鼠血清中TNF-α和TNF-β的表达量降低。 　　关键词：姜黄素；泡状棘球蚴；TNF-α；TNF-β 　　泡型棘球蚴病（Alveolar echinococcus，AE）是由多房棘球蚴绦虫（Echinococcus multilocularis，E.m）幼虫引起的一种致死性人兽共患寄生虫病。不经治疗者10年致死率可达93%以上[1]。患者术后复发率高[2]，药物治疗是目前最主要的治疗手段。大量研究表明，姜黄素（Curcumin）具有抗炎、抗氧化、抗纤维化、抗肿瘤和抗多种寄生虫病等作用，且价格低廉、副作用小。课题组前期研究发现，泡状棘球蚴的浸润性生长和转移与肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor，TNF）等炎性因子密切相关。本研究假设Cur对E.m有治疗作用，建立肝泡状棘球蚴小鼠模型，通过灌药的方式进行干预，检测TNF-α和TNF-β在小鼠血清中的表达，初步探讨姜黄素在小鼠肝泡状棘球蚴生长发育过程中对TNF-α和TNF-β的影响。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 　　1.1.1种鼠和实验动物 24w龄灰仓鼠（泡球蚴腹腔保种16w）2只，体重分别为56g、59g；18w龄健康雌性昆明小鼠132只，体重（25+5）g，均购于新疆自治区疾病控制中心。 　　1.1.2主要试剂和仪器 姜黄素和姜黄素溶剂（羧甲基纤维素钠）均购于美国Sigma-Aldrich公司，阿苯达唑采用临床治疗所用阿苯达唑药剂，小鼠TNF-α ELISA试剂盒、小鼠TNF-βELISA试剂盒均购于美国USCN公司，xMark酶标仪（美国BIO-RAD公司）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动物分组 将132只18w龄[3]健康雌性昆明小鼠随机分为姜黄素组、姜黄素溶剂注射组、阿苯达唑组、姜黄素+阿苯达唑联合用药组、模型对照组、空白对照组。除空白对照组外其余各组小鼠每只均接种0.1mlE.m混悬液。 　　1.2.2 动物模型的建立 对种鼠行颈椎脱臼快速处死并固定于操作台，无菌条件下常规开腹，选取腹腔中光滑、游离、透亮、成簇的泡球蚴组织，充分剔除宿主的系膜及纤维组织后，用含双抗（100U/ml青霉素和链霉素）的无菌PBS液漂洗3次，剪碎、研磨、80目钢筛过筛，再用无菌PBS液（含双抗）冲洗，静止5分钟，抽吸上清液和部分浑浊液，重复3次，彻底剔除宿主细胞及坏死组织，加青霉素和链霉素250IU/ml，配 成 浓 度20%的混悬液，0.5%伊红染色后高倍镜下观察泡状棘球蚴原头节活性。活性头节，1-3/高倍镜视野，结构清晰，着色率15%。20%乌拉坦麻醉（4ml/kg）后采用切开上腹部经腹壁肌层透视下肝穿刺接种[4]，每只注射0.1mlE.m混悬液。 　　1.2.3 各组小鼠的灌胃 空白对照组和模型对照组小鼠不进行灌胃，姜黄素组每只小鼠7.5mg/d，姜黄素溶剂组（0.5%纤维素钠溶液）每只小鼠0.2ml/d，阿苯达唑组每只小鼠1.25mg/d，姜黄素+阿苯达唑联合用药组每只小鼠1.25mg阿苯达唑+1.25mg姜黄素/d，接种E.m60d后持续灌胃60d，最后一次灌胃于处死小鼠4h前进行。 　　1.2.4 小鼠血清的采取 对各组小鼠行摘眼球取血，置于生化管中后3000r/min离心25min，取上清液即血清-20°C冻存备用。 　　1.2.5 酶联免疫吸附试验（ELISA） 采用ELISA试剂盒对各组小鼠血清样本进行TNF-α、TNF-β检测，通过酶标仪读取吸光度（OD）值，并最终计算出浓度。 　　1.2.6 统计学分析 实验结果以率和（x±s）表示，多组之间感染率的比较采用x2检验；各组Elisa结果用（x±s）描述，采用方差分析；按α=0.05为水准，以P0.05为统计学有显著差异性。采用SPSS17.0软件分析处理。 　　2 结果 　　2.1 造模情况 各组小鼠感染率（肝脏成功感