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第四模块 色谱检测技术 第一节 薄层色谱法 学习目标 理解薄层色谱法的基本分离原理；理解薄层扫描法的定量分析原理；掌 握薄层色谱法的具体应用 复习提问 红外分光光度计的分类及基本部件。 红外分光光度法在药品检验中的主要应用。 新课大纲 色谱过程 概述：分类、原理、优缺点 背材、吸附剂、展开剂的选择 各步骤的主要操作方法 定性和定量方法 一、概述及基本原理 色谱过程 　　实现色谱操作的基本条件是必须具备相对运动的两相，固定相(stationary phase)和流动相(mobile phase)。 　　色谱过程是组分的分子在流动相和固定相间多次“分配”的过程。 1.背材： 支持吸附剂的材料。 光滑平整耐腐蚀，常用玻璃板。 预制板有：铝和塑料 扫描用：长度为10、15、20， 　　　　宽度10、20 2.吸附剂： （1）性质： 活性即保留溶质组分的程度，有较大的吸附面积，普通板粒度为20微米，高效板为5微米　 （2）常用： 硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺、葡萄糖凝胶 （3）选择原则：样品组分的性质和吸附剂的性质 3.展开剂： (1)对展开剂的要求： 能够溶解待测组分 能使待测组分与杂质分开 使待测组分Rf值在0.2－0.8 不能与组分及吸附剂发生化学反应 展开后斑点圆而集中。 （2）性质：极性、强度、选择性 （3）选择：一元、二元、多元 1.薄层板的制备 2.样品溶液的配制 3.点样 4.展开 5.显色和定位 6.常见问题和消除方法 三、在药物分析中的应用 1.定性鉴别 2.药品质量控制和杂质检查 3.化学反应进程的控制,反应副产物的检出以及中间体的分析 4.柱色谱法分离条件的探索 四、定性定量分析方法 1.定性：色谱鉴定－利用Rf值 　　　　化学鉴定－试剂显色反应 　　　　薄层色谱与光谱联用 2.定量：洗脱后定量法－紫外 　　　　原位定量法－ 薄层扫描法 目视比较法（如杂质限度检查方法） * 学习目标 复习提问 新课大纲 新课内容 本课小结 课后习题 * 第七章　色谱分析法 技能目标： 能应用薄层色谱法对药物定 性鉴别及定量分析 知识目标： 1. 2. 3. 4. 5. 本章主要内容： 1.概述 组分的结构和性质微小差异 与固定相作用差异 随流动相移动的速度不等 差速迁移 色谱分离 色谱过程图解 2.薄层色谱法概述 　　　将固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质）比较进行定性和定量分析。 3.原理 ??? 　　组分在薄层板上多次吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。 通过吸附系数不等实现组分的分离。 4.分类 根据其分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱 根据分离方法分为：纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。 优点： 快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。 试样预处理简单，对试样限制少。 载样量比较大，适用于制备。 仪器简单，操作方便。 分离能力较强。 灵敏度较高。 缺点： 重现性差：尤其是定量每步要严格操作 色谱板不易保存 5.优缺点： 二、操作方法及仪器 （一）背材、吸附剂、展开剂的选择 展开剂(流动相) 同吸附柱色谱 极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序： 　　　水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳环己烷石油醚。 展开剂 混合溶剂 先用单一溶剂展开， 若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等， 如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。 可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。 （二）各步骤的 主要操作方法 1.薄层板的制备 ⑴一般薄层板的制备： 均匀铺层：0.2－0.3mm 检查：对着亮光、看基线、牢固 比例：硅胶G与水　　1：3 　　　硅胶H与水　　1：2 　　　氧化铝与水　　1：1.5－2 ⑵制备型：20χ30 ⑶.仪器与材料 　Ⅰ玻板 　　　除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格,要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 Ⅱ固定相或载体 最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、 硅胶HF254,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、 微晶纤维素F254等。 其颗粒大小,一般要求直径为10～40μm。 薄层涂布,一般可分无粘合剂和含粘合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻璃板上, 后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10～15％