血清脂类测定.pptVIP

【试剂与器材】 1. 甘油三酯测定试剂盒 2.血清 3.酶标仪，酶标板，板条，微量进样器 4.生化培养箱 结果与计算 血清甘油三酯= * * 血清脂类测定 浙江中医药大学 生命科学学院 生物化学教研室 【实验目的】 学习血清甘油三酯的测定原理。 掌握甘油三酯的测定方法和操作技术。 【实验原理】 血清中甘油三酯经脂蛋白脂酶(LPL)作用，可以水解为甘油和游离脂肪酸(FFA)，甘油在ATP和甘油激酶(GK)的作用下，生成3-磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化酶(GP0)作用氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢(H202)， H202与4-氨基安替比林(4-AAP)及4-氯酚在过氧化物酶(POD)作用下，生成红色醌类化合物，其显色程度与TG的浓度成正比。 【实验原理】 脂蛋白脂酶（LPL） ①甘油三酯 甘油+游离脂肪酸 甘油激酶 ②甘油+ATP 3一磷酸甘油 磷酸甘油氧化酶 ③3-磷酸甘油 磷酸二羟丙酮+过氧化氢 过氧化物酶 ④H202+4-氨基安替比林+4-氯酚 红色醌 （苯醌亚胺非那腙） 【操作步骤】 1.配制工作试剂： 取R1：R2=9：1 （2.7：0.3） 的比例配制工作试剂,置于玻璃试管或小烧杯中（比需要的总量多配一点,可以几组合作一起配制,减少浪费）。 【操作步骤】 2.取酶标板1块，板条1条，按下表操作： 空白管 标准管 测定管 测定管 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 血清 一 一 — 6μl 6μl 6μl 6μl 标准液 一 6μl 6μl — — — — 生理盐水 6μl 一 一 — — — — 工作试剂 300μl 300μl 300μl 300μl 300μl 300μl 300μl 3.置于37℃生化培养箱10min，492nm波长处在酶标仪上读取各管的吸光度A。 测定管吸光度平均值 标准管吸光度平均值 × 标准物浓度 （mmol/L ） （mmol/L） 甘油三酯标准物浓度为2.26m mol/L 【结果与计算 】 甘油三酯： TG正常范围：0.55-1.70mmol／L 边缘增高：1.7-2.25mmol／L 增高：2.26-5.64mmol／L 很高：大于、等于5.65mmol／L。 【临床意义 】 血清TG增高常见于家族性脂类代谢紊乱、肾病综合征、糖尿病、甲状腺功能减退、急性胰腺炎、糖原积累病、胆道梗阻、原发性甘油三酯增高症、动脉粥样硬化等。 血清TG降低比较少见，慢性阻塞性肺疾患、脑梗死、甲状腺功能亢进、营养不良和消化吸收不良综合征等可引起血清TG的降低。 【注意事项】 1.本方法没有进行抽提和吸附，所以血清中游离的甘油对TG测定结果有一定的影响。 2.方法中所用酶试剂在4℃避光保存，至少可稳定3天至1周，出现红色时不可再用，试剂空白的吸光度应＜0.050。 3.取血注意事项： 要求空腹12h后再进行采血，并要求72h内不饮酒，否则会使检测结果偏高。无论是使用血浆还是使用血清作为检测标本，取血后都应及时分离，以免红细胞膜磷脂在磷脂酶的作用下产生游离甘油(FG)，或者抗凝剂存在时红细胞内水溢出而稀释血浆降低TG值。分离血浆前，标本最好放于冰水中，并尽快分离血浆，避免TG自发水解出现误差。 4.本实验方法的线性上限为