微生物实验05.培养基的制备和消毒灭菌讲义.ppt

实验五、培养基的制备和消毒灭菌 一、培养基的制备： （一）目的要求： 学习掌握配置培养基的一般方法、步骤和原理。 （二）原理： 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、生长因子、无机盐和水等营养要素。 由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基。 培养基的制备原则： 1.根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基。 2.调配好培养基营养成分的浓度和比例。 3.控制微生物的培养条件（渗透压、pH、氧化还原电位等） （三）器材： 1.药品和试剂： 葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、琼脂、NaCl、K2HPO4、 KH2PO4、 KNO3、MgSO4、 FeSO4、孟加拉红、1mol/L NaOH、 2.器材： 试管、烧杯、三角瓶、量筒、玻璃棒、铁架台、漏斗、天平、牛角匙、高压锅、微波炉、 pH试纸（5.5-9.0）、棉花、纱布、线绳、聚丙烯袋等。 （四）步骤： 斜面培养基制作： 计算 称量 加热溶化 调PH 过滤（可省略） 分装 加塞（附棉塞制作） 包扎 灭菌 摆斜面 无菌检查 1.称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状药品（如牛肉膏），应用烧杯和玻璃棒称量。 2.配制 向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。 如果配制固体培养基，在琼脂熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。一般要求琼脂沸腾3次，完全熔化后，补足所失水分。 3.调节pH值 培养基溶解用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1M HCl和1M NaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。 4.过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。 5.分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（1）斜面：装量为管长的1/5。（2）液体培养基：装量为管长的1/4。 （3）半固体培养基：装载量为管长的1/3。 棉塞制作 牛肉膏蛋白胨培养基（ g/L,培养细菌用） 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g（取18g） 水 1000ml pH 7.0-7.2 121℃灭菌20min 高氏1号（ g/L,培养放线菌用） 可溶性淀粉 20g KNO3 1g NaCl 0.5g K2HPO4 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 琼脂 15-20g（取18g） 水 1000ml pH 7.2-7.4 121℃灭菌20min 马丁氏培养基（g/L,分离真菌用） 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g KH2PO4 1g MgSO4 0.5g 1/3000 孟加拉红 100ml 琼脂 15-20g （取18g） pH 自然 水 补足至1000ml 115℃灭菌30min （五）注意事项： 1.称量要准确，取药品的角匙不能混用。 2.加热融化时要不断搅拌，以免糊底和溢出,（每加