基因组编辑技术在植物中的研究进展与应用前景.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（６）：９９１０４ 基因组编辑技术在植物中的研究进展与应用前景 １，２ ３ １，２ １，２ １，２，４ １，２，３，４ 谢　科 　饶力群 　李红伟 　安学丽 　方才臣 　万向元 （１主要农作物种质创新国家重点实验室　北京　１００１９２　２北京金冠丰生物技术有限公司　北京　１００１９２） （３湖南农业大学生物科学技术学院　长沙　４１０１２８　４山东冠丰种业科技有限公司　冠县　２５２５００） 摘要　外源ＤＮＡ导入细胞并与基因组靶基因发生同源重组可以精确修饰或替换靶基因，但在植 物中产生自发同源重组的概率很低。近几年出现的人工改造核酸酶可以大幅提高同源重组的效 率，实现基因组的精确、定向改造。其中，归巢核酸酶、锌指核酸酶和ＴＡＬＥ核酸酶已在植物基因 工程中得到成功应用，最近开发出来的基于ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统的基因组编辑技术则更具有高效方 便等特点。这些人工核酸酶的应用为植物基因工程的发展呈现了更加美好的前景。首先介绍了 基因组编辑技术及其发展历程，随后详细阐述了提高植物基因组定点编辑效率的策略，最后对基 因组编辑技术在农业和植物基因工程上的应用进行了展望。 关键词　植物基因工程　基因组编辑　同源重组　人工核酸酶 中图分类号　Ｑ８１９ 　　基因组编辑（ｇｅｎｏｍｅｅｄｉｔｉｎｇ）是指将外源 ＤＮＡ元 相近的位点发生重新组合，从而整合到受体细胞的染 件导入到细胞染色体特定位点，定点改造基因组，获得 色体上；非同源重组是指发生了 ＤＮＡ双链断裂 预期的生物体基因组序列发生遗传改变的技术。基因 （ｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋｓ，ＤＳＢ）的细胞，为了避免 ＤＮＡ或 工程诞生之初，对基因组进行定点改造还只是一个梦 染色体断裂的滞留造成ＤＮＡ降解或对生命力的影响， 想。１９８７年，科学家利用基因同源重组（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ 强行将两个 ＤＮＡ断端彼此连接在一起的一种修复机 ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，ＨＲ）技术，在小鼠胚胎干细胞中实现了 制。发生ＮＨＲ的细胞其基因组常出现核苷酸片段的 特定位点的功能基因敲除（ｋｎｏｃｋｏｕｔ）和定点改造突变 插入和／或缺失以及其它突变等多种情况，研究者无法 ［１２］ 得到精确控制的突变结果；而发生 ＨＲ的细胞基因组 基因以恢复基因功能（ｋｎｏｃｋｉｎ） ，这标志着以基因 打靶（ｇｅｎｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）为代表的基因组编辑技术的建立。 ＤＮＡ序列通常不变，通过加入同源重组的供体 ＤＮＡ， 依靠细胞内的自发同源重组，基因打靶在原核生物、酵 人们可以实现对基因组的精确修饰和改造。 母和胚胎干细胞中得到了较好应用，但由于在多细胞 　　由于在植物中产生自发同源重组的概率很低，对 生物中同源重组发生的概率很低，该技术在植物中的 植物基因组进行精确修饰和改造非常困难，本文将针 应用受到极大限制。 对这个问题介绍提高植物同源重组效率的策略，特别 　　在植物中，当外源ＤＮＡ通过转基因技术导入植物 是最近几年位点特异性核酸酶的出现和应用，大大提 细胞后，会以同源重组或非同源重组（ｎｏｎｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ 升了同源重组的效率，使基因组编辑变得更加高效和 ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，ＮＨＲ）两种不同的方式整合到基因组中。 精确，从而使得对包括植物在内的任何物种进行基因 其中，同源重组是指外源ＤＮＡ与受体细胞序列相同或 组编辑都将成为可能。基因组编辑技术在植物基因工 程和农业上的应用将为我们带来更加美好的前景。 收稿日期：２０１３０５０２ 国家“９７３”计划（２０１０ＣＢ３５７０２、２０１２ＣＢ７２３７０３）、国家发改委生 物育种专项 （２０１２２１５０２９９）、山东省 自主创新工程招标项 目 １　提高植物基因组定点编辑效率的策略 （２０１２ＳＤ０９１０１１）资助