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ConstructionofMEIS2KnockoutHEK293TCellLinebyCRISPR
网络出版时间：2015-03-30 15:34
网络出版地址：/kcms/detail/31.2035.Q1534.006.html
中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2015, 37(4): DOI: 10.11844/cj cb.2015.04.0020
利用CRISPR/Cas9技术构建敲除MEIS2基因的
HEK293T人胚肾细胞系
1 2 2 2 2 2,3 2 2
卢利莎 白 杨 刘 鑫 王洪涛 高 洁 杨亦青 苏 培 刘翠翠
2 2 1* 2*
王 钰 张磊升 熊 涛 周家喜
1 2
( 长江大学生命科学学院, 荆州434025; 中国医学科学院, 北京协和医学院血液病医院(血液学研究所), 实验血液学
国家重点实验室, 天津300020; 3河北北方学院医学检验学院, 张家口075000)
摘要 CRISPR/Cas9 系统作为一种新型的基因组编辑技术, 利用人工设计的向导RNA (sin-
gle-guide RNA, sgRNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA
的特异性切割, 切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进行修复, 从而实现
基因的敲除、敲入等。MEIS2属于一类高度保守的同源盒转录因子MEIS家族, 研究发现, MEIS2
广泛参与胚胎的早期发育及肿瘤的发生发展, 但其发挥作用的机制目前还不是很清楚。该研究针
对MEIS2基因作用的功能域, 设计2个靶向MEIS2基因Exon3和Exon8的sgRNA, 通过SURVEYOR分
析及Western blot检测, 确认了所设计sgRNA 的有效性。进一步通过细胞分选及Western blot检测筛
选出稳定敲除MEIS2基因的HEK293T细胞株。最后, 通过序列测定确认MEIS2发生了移码突变。
综上所述, 该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了完全敲除MEIS2 的HEK293T细胞株, 为研究
MEIS2 的功能和作用机制提供了有效工具。
关键词 MEIS2 ; CRISPR/Cas9系统; 基因敲除
Construction of MEIS2 Knockout HEK293T Cell Line by
CRISPR/Cas9 Technology
1 2 2 2 2 2, 3 2 2 2
Lu Lisha , Bai Yang , Liu Xin , Wang Hongtao , Gao Jie , Yan
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