蛋白质自剪接及其在蛋白质工程中的应用.pdfVIP

2004年全国生物技术学术研讨会论文集 大会专题报告 蛋白质自剪接及其在蛋白质工程中的应用 袁静明石亚伟郭晨云李卓玉 (山西大学生物技术研究所，太原030006) 两个新的蛋白质产物。这种剪接功能是由剪接单元中特殊基团的化学作用引起的，它不需要任何酶或能 已报道在古细菌，真细菌，单细胞真核生物中普遍存在这类剪接单元。经过10多年对蛋白质自剪接的 深入研究。不但阐明了它的作用机理，而且在蛋白质工程领域中发挥了积极的作用。这一研究既扩展了 人们对遗传学《中心法则》的视野，还为重组蛋白的研究与应用开辟了一条新的途径。 内蛋白子：它是由归位内切酶(homing 中只呈现内蛋白子的剪接功能。当它从前体蛋白中剪切下后，才能呈现核酸内切酶活性。利用DNA重 组技术，可以将编码核酸内切酶活性的DNA片段“敲掉”，只保留剪接单元，这样的内蛋白子仍有剪 蛋白子称mini-intein(一般含200左右氨基酸残基)。 体外剪接系统：为便于研究蛋白质自剪接的反应机理，必须从基因水平上构建体外剪接系统，美国NEB 理奠定了基础。 蛋白质自剪接机理：由NEB徐明群博士等提出的蛋白质剪接原理已被广泛接受。主要是经intein末端 肽键与酯键的相互转移进行剪接。他们以MIP为模型取得了满意的结果。包括：(1)内蛋白子C．端与 蛋白予与内蛋白子再进行O-N或S-N转移。(4)内蛋白子两侧的外蛋白子重新结合成新的蛋白质，内 蛋白子恢复内切酶活性 蛋白质自剪接在蛋白质工程中的应用：茬重组目的蛋白或肽的纯化中首先得到了肯定。利用目的蛋白 在intein的C-端或N端的融合表达，经还原剂如D仃的化学拆除就能获得单一的目的蛋白。避免了用 昂贵的蛋白酶拆除融合蛋白的常规方法。特别适用于有毒蛋白和昂贵的蛋白或多肽药物的制备。由于内 蛋白子融合表达系统可用E．coli，酵母，昆虫细胞和动物细胞等作为宿主细胞。因此，这一技术为基因 工程药物的开发提供了一条新的途径。近年来，还将intein介导系统通过DNA重组技术扩大到蛋白质 -蛋白质或蛋白质·肽的连接，环化和聚合等诸多方面。特别值得二提的是利用intein介导蛋白质连接功 因中。然后用N”分别标记表达，再利用intein性质连接成完整蛋白质。这样用分段标记的融合蛋白进 行NMR分析同完整目的蛋白的NMR分析进行综合比较。就可得到一个大于50kD蛋自质的结构信息。 排除了在NMR测定中由于标记分子的信号重叠而只能解30-40kD蛋白质的缺陷。 29