实时荧光PCR课程.pptx

PCR _UU、NG、CT测定 LOREM IPSUM DOLOR PCR技术基本原理 一、定义 PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。 二、PCR反应的基本过程 ①变性（denaturation） 将模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA经加热至94℃左右一定时间后，双链之间的氢键断裂，双股螺旋解链，变成两条单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。 二、PCR反应的基本过程 ②退火(annealing) 模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； 二、PCR反应的基本过程 ③延伸（extension） DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按A-T、C-G碱基配对与半保留复制原则，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复变性--退火--延伸的循环过程，就可获得更多的“半