分子克隆酶分解.ppt

七、RNase H 内切核酸酶，特异性水解与DNA杂交的RNA上的磷酸二脂键，产生3’-OH和5’P末端的产物 不降解，单链核酸，dsDNA or dsRNA 用途： 在cDNA克隆，合成第二键之前去除RNA 用脱氧核苷酸指导在特异位点切割RNA 分析体外多聚腺嘌呤反应的产物，在与Olig(T) or ploy (dT)杂交后，去掉poly(A)尾 八、RNase OneTM 27kDa Promega公司 降解RNA至小分子，以至3’NMPs 是唯一可在所有4个碱基处 　切割磷酸二脂键 由于可来自基因工程产品 　无其它DNA切割活性，无需boiling 第七节 其它酶 一、T4多核苷酸激酶 　　 T4 polynucleotide kinase 催化ATP的 ?-磷酸基转移至 DNA或 RNA的 5’末端 还具有3’磷酸酶活性 *：高浓度ATP发挥最佳活性。NH4+强烈抑制剂 5’凸出单链效率高 交换反应： 用于标记5’末端，制备探针 过量的ATP可使该激酶将磷酸化的5’端磷酸转移给ADP，然后DNA从[?-32p]ATP中获得放射性标记的?-磷酸而重新磷酸化 正反应：ATP的 ?-磷酸基被转移到去磷酸化的 DNA 5’端，用于对缺乏 5’-磷酸的 DNA进行磷酸化。以致可用于DNA连接, Maxam-Gilbert