基因捕获技术及其在水稻突变体库构建上的应用.pdfVIP

叶现代农业科技曳圆园园9年第2期 大田农艺 基因捕获技术及其在水稻突变体库构建上的应用 李素一 渊福建师范大学生命科学学院袁福建福州 350007冤 摘要 基因捕获是一种新的基因标签技术袁被广泛应用于植物突变体库的构建及基因分离遥近年来袁基因捕获技术应用于水稻突变体 库构建方面取得了显著进展曰介绍了基因捕获技术及其在水稻突变体库构建上的应用遥 关键词 基因捕获曰报告基因曰水稻突变体库 + 中图分类号 Q343.13 文献标识码 A 文章编号 1007-5739渊2009冤02-0125-02 水稻是世界上最重要的三大经济作物之一袁同时也是 含子捕获载体和外显子捕获载体渊见图 1D冤遥前者通常由报 生命科学研究的模式植物袁水稻基因组的全序列得到破译 告基因和1个或者几个剪接受体位点渊spliceacceptor袁SA冤组 之后袁分离和研究水稻中的基因功能成为一项迫切而重要的 成袁剪接受体位点在报告基因上游遥该重组体如果插入到基 任务遥基因捕获是一种将带有报告基因的重组载体随机整合 因组的内含子中袁从染色体基因的剪接供体位点到报告基 到基因组中袁使插入基因被激活或失活袁然后通过检测报告 因的剪接受体位点的剪接就会使上游外显子与报告基因 基因的表达和利用一些基于PCR 的分子生物学技术来分 融合袁从而使报告基因随着基因转录和表达遥后者插入在 离被插入基因的研究基因功能的新方法遥目前袁它已被广泛 基因的外显子袁因此不需要添加SA位点就可以产生融合 应用于植物突变体库的构建和基因分离遥近年来袁基因捕获 mRNA袁所以如果能检测到融合转录物或融合蛋白袁就可以 技术应用于水稻突变体库构建方面取得了显著进展袁本文 证明插入位置附近有基因存在遥 介绍了基因捕获技术及其在水稻突变体库构建中的应用遥 这3种捕获系统各有优缺点袁增强子捕获不受插入位置 [2] 1 基因捕获系统的类型 的限制袁且捕获频率往往较高袁甚至可高达60% 遥但由于增 基因捕获包括3种系统类型院增强子捕获渊enhancertrap冤尧 强子与基因的位置可近可远袁故增强子捕获不易定位基因遥 启动子捕获渊promotertrap冤和基因捕获渊genetrap冤袁而基因 启动子捕获系统捕获的频率比增强子捕获系统低袁但它产生 [1] 的突变频率较高遥除转录融合外袁启动子捕获和增强子捕获 捕获实际上是这3种类型的统称 遥 1.1 增强子捕获系统 还能创造翻译融合袁从而为蛋白质定位提供信息遥 增强子捕获系统是将报告基因与一个 A Enhancer TATA 最小的启动子相连袁组成一个增强子捕获 GenomicDNA 重组体渊见图 1B冤遥典型的最小启动子含有 TATAbox及转录起始位点袁它不能单独驱 动报告基因的表达袁只有当它被插入位点 B Enhancer TATA 附近的增强子激活时袁才可起始转录而使 TATAreporter EnhancerTrap 报告基因表达遥由此可推知插入位点附近有 增强子或基因袁即实现了以该增强子捕获系 统来发现增强子的目的遥 Enhancer TATA