4相差显微镜的调试与使用教案.ppt

第二节 相差显微镜 的调试与使用 相差显微镜特有的结构 环状光栏 相差物镜 合轴望远镜 强光低热的光源 重点了解转盘聚光器的光栏和插片式光栏的使用（环状光栏的选择与调节） 找一找下列标识，思考其功能： 1. 普通光栏与可变光栏 2.小红点(要求面向操作者） 3. 相差物镜匹配的环状光栏10×， 20 × ， 40 × （与小红点对齐） 4. 相差物镜的标识ph 5. 光栏移动调节杆 6. 转盘聚光器高度的调节 相差显微镜的工作原理 光的衍射 光的干涉 相长干涉与相消干涉 明反差与暗反差 调试方法 1 将显微镜的2个普通物镜分别换成相应倍数的的相差物镜（10倍或40倍）。 2 旋松固定聚光镜的螺杆， 将普通聚光器换成具有环状光阑的聚光器；旋松调节柄的小螺杆，使0对着操作者。 3 在底座的光源上方安装滤光片。(如果没有，则可以省去此步骤） 4将光源亮度开关调至最小，插上电源，打开开关，慢慢将亮度调至合适。 5 在载物台上放置一标本（永久装片-人血液涂片），使用10倍的相差物镜，聚焦使物像清晰，然后移去标本。 6 将聚光器下转盘的10对着操作者。这时10倍的相差物镜正好与10倍所需的环状光栏匹配。 7 应用起子或6角内扳手旋松固定目镜的螺杆，取下一目镜，装上合轴望远镜， 旋松合轴望远镜的固定螺杆，调节合轴望远镜的镜筒长度，使相差物镜的相板黑环成的像清晰，然后固定合轴望远镜的长度。缓慢调节聚光器的高度，使环状光阑亮环的像清晰。 8 边观察视野内的暗环和亮环，边前后推动聚光器下圆盘两侧的拉杆（先旋松才能推动），移动环状光阑，使黑环和亮环重合,然后旋紧拉杆。 9 移去合轴望远镜，将目镜重新安上，并固定好目镜。 10 放上标本观察。 标本的制备 1. 制作口腔上皮细胞涂片 用牙签轻轻刮取口腔黏膜上皮细胞，涂在载玻片上，滴一滴PBS或生理盐水( 磷酸盐缓冲液），盖上盖玻片，用滤纸吸去多余的液体，置于相差显微镜下观察。（10倍或20倍物镜下） 观察 1放置活细胞标本进行观察。注意物像与背景的明暗反差，以及细胞内的细微结构。 2 换上40倍的相差物镜和40倍的环状光阑，重复调试步骤的5－9。再放上标本进行观察。 2 绘图表示相差显微镜下观察到的口腔上皮细胞的结构。 3. 分成3个大组，参观电子显微镜室，了解电子显微镜的大致结构。（光源，成像系统，样品室，观察记录系统，真空系统，供电系统） 作业： 1 相差显微镜有哪些特殊的结构？ 2 如何进行生物绘图？ 生物绘图要求 (1）科学性和准确性 。 （2）点、线要清晰流畅 线条要一笔画出，粗细均匀，光滑清晰，接头处无分叉和重线条痕迹，切忌重复描绘。植物图一般用圆点衬阴，表示明暗和颜色的深浅，给予立体感。点要圆而整齐，大小均匀，根据需要灵活掌握疏密变化，不能用涂抹阴影的方法代替圆点。 （3）比例要正确 。 （4）准确的标注 图注一律用正楷书写，应尽量详细，并要求用水平的直线引出，最好在图的右侧，必须整齐一致。作为实验报告，图及图注一律要求用铅笔，通常用2H或3H铅笔，不要用钢笔、有色水笔或圆珠笔。图题写在图的下方。 学生作业举例 * 实验目的与要求 1掌握相差显微镜的工作原理，调试方法。 2 使用相差显微镜观察活细胞的精细结构 实验材料： 无菌牙签 ，生理盐水（0.9%），吸水纸 根据上次实验的结果思考，普通显微镜能观察清楚活细胞的精细结构吗？为什么？ 解决这个难题获得了诺贝尔奖。 培养细胞 *