限氮培养对分支链氨基酸发酵的影响.pdfVIP

J016 限氮培养对分支链氨基酸发酵的影响 方正星 1 张克旭 1 刘淑云 1 史 楠 1 杨 芳 1 刘树海 1 陈 宁 1,2 （1天津科技大学生物工程学院， 天津 300222） （2天津市工业微生物重点实验室， 天津 300222） 摘要 氮代谢在分支链氨基酸发酵过程中起到很重要的作用。由于氮的限制不利于氮代谢流分支 链氨基酸积累，据此可以氮代谢流来分析分支链氨基酸的代谢过程，并以氮的同位素示踪法分析 出氮在代谢过程中的转化情况以及据此推算出氮的转化率。通过代谢流分析，使用物料衡算方法， 对所有的胞内反应建立一个基于化学计量的代谢流平衡模型，并利用该模型计算不同途径的代谢 流分布；利用发酵过程中的检测数据，对代谢网络进行定量分析，并计算出分支链氨基酸发酵的 不同时期的代谢流分布，从而对分支链氨基酸的发酵控制进行优化。 本研究主要通过对发酵培养基进行限氮，在培养基中只添加满足菌体基本生长需要的氮源， 其他的成分与基本发酵培养基一致。在培养过程中将用基本发酵培养作平行对比，培养条件是一 致的；在发酵过程中，都通过流加尿素来调节 pH值。通过两者实验的产酸率和糖酸转化率的结 果比较，可以分析出限制部分的氮的主要代谢方向，从而为下一步的研究奠定基础。 通过限氮培养与基本培养的结果比较可知，在限氮条件下目的氨基酸的产率很低。研究发现 在限氮条件下同不限氮条件下相比， L－异亮氨酸产量下降 81％，L－亮氨酸产量下降 95％，L －缬氨酸产量下降 83％；L－异亮氨酸糖酸转化率下降 64％，L－亮氨酸糖酸转化率下降 72％， L－缬氨酸糖酸转化率下降 66％。从数据可以看出，在限氮条件下，产酸率和糖酸转化率都大幅 度的下降。表明氮源对分支链氨基酸发酵具有重要影响。 关键词 限氮 分支链氨基酸 产量 糖酸转化率 中图分类号 文献标识码 文章编号 LIMITING NITROGEN CULTIVATION TO THE INFLUENCE OF BRANCH CHAIN AMINO ACIDS FERMENTATION FANG Zhengxing1，ZHANG Kexu1 ，LIU Shuyun1，SHI Nan1， YANG Fang1，LIU Shuhai1 and CHEN Ning1,2 (1College of biotechnology，Tianjin university of Science and Technology，Tianjin300222,China) (2Tianjin key lab of industrial Microbiology, Tianjin300222,China) Abstract The metabolism of the nitrogen rises the very important function in the branch chain amino acids ferment process .As limiting nitrogen is disadvantage for metabolic flux accumulating of the branch chain amino acids, we analyzed the metabolic process of the branch chain amino acids by the metabolic flux of the nitrogen ,and reckoned conversing rates of the nitrogen in the process by the tracer method with isotope.According the analysis of the metabolic flux ,metabolic fluxΘ balance model (MFB) based on stoichiometric was set up in all cells by using the arithmetic Θ 2004-09-25收到初稿， Received date: 2004-09-25. 1 of materiel balance,and the metabolic flux distribution of different pathw