黄瓜霜霉病抗病基因dm的RAPD及SCAR分子标记.pdfVIP

丁国华“2秦智伟”‘周秀艳1 范金霞1 50301) 50030，2哈尔滨师范大学阿城学院阿城市1 (1东北农业大学园艺学院哈尔滨1 摘要：用318条RAPD3【物扩增黄瓜感病亲本L18-10-2和抗病亲本129，有239条引物获得扩增产物， 18条存两亲本间扩增出多态性片断。采用选择性基冈型分析法进行了连锁分析，其中引物P18的扩增片段 54cM。对该多态性片断进行回收、 SBSPl8Ⅻ，与抗病摹因(din)之间有比较紧密的连锁，遗传距离为10 克隆和测序，根据其序列台成1对特异引物．经PCR年41Southern杂交验证，成功地将RAPD标记转化成 稳定的SCAR标记，[t0SSBSPl8-“。 关键词：黄瓜；霜霉病抗性基因(dm)：SCAR标记；RAPD标记 黄瓜霜霉病是一种流行性很强的叶部病害，由Psuedoperonospora 引起，每年给黄瓜生产造成的损失很大。目前多数人认为黄瓜对霜霉病的抗性由一隐性基因(din)控 制【1。3】，但至今还未分离到该基因。借助分子标记辅助选择(marker-assisted 地避免常规育种的依靠表型进行选择的不准确性和复杂性，有效地促进了由隐性基因控制的性状的培 育。 et 迄今已经报道的黄瓜dm基因的分子标记有：Kermard oM和17．7 markers，CSC230，EcoRJ和CsC593仍mI，分别相距9．5 cMpl。由于RFLP和同工酶标记在 同工酶标iluPgm(phosphoglucomutase，葡萄糖磷酸变位酶)，相距14 cM¨l。 多个RAPD连锁标记，其中最近的连锁距离为9．9 characterized amplified SCAR标记特异性和重复性较好，操作简单、快捷，在分子标记辅助育种中具有重要的实践应用价值。 其他基因型或基因组中也能得到扩增片段，将其转化成SCAR标记比较困难。此外，材料的抗性来源 不同，或标记与抗病基因之间发生重组，也可能导致转化失败。RAPD标记向SCAR标记转化通常还 需要进行一些试验处理方能成功。如选择合适的限制性内切酶消化PCR扩增产物；设计多条SCAR引 物；选用不同的SCAR引物组合以及优化扩增条件等“J。 本文报道使用RAPD引物标记黄瓜dm基因和转化SCAR标记的结果。 1材料与方法 1．1植物材料 到Fl代植株，命名为215。F一代大量自交，单瓜采收，获得F2代种子，种植分别得到F2自交分离群 体279株。 上述黄瓜材料均来自东北农业大学园艺学院瓜类课题组，杂交及繁育丁作在园艺学院实验基地完 成。 208) ’国家863计划项目(合同编号：2002AA207013)，黑龙江省博士后资助挂余项目(LBR04 “通讯作者：qinzw@neau．edu．∞ 317 1．2黄瓜霜霉病抗病性鉴定 参照傅淑云等(1984)利王超等(2000)子叶点滴接菌方法进行……。病菌取自感病叶片保湿后重 新长出来的新鲜孢子囊，加灭菌水配制成孢子囊悬液，调整孢子囊浓度为120倍的显微镜每个视野下 平均15～20个。 试材播种后7～10天，子叶平展时，用微量注射器在子叶的中部点一滴约0．01ml的孢子囊恳液， 尽可能保持液滴大小一致。接种后严禁震动，保湿12～24h。第七天调查鉴定。 病级分级标准： 0级 无病斑 1级 不明显褪绿斑 2级 明显褪绿斑，病斑较小，无扩大 3级 明显褪绿斑，病斑扩大 4级 黄枯斑，病斑较大，有少量霉层