黑曲霉液体发酵分泌纤维素酶系特性的研究.pdfVIP

酶制剂鬻瑞烈襞糕褓丽丽瓣r—————～———————一 黑曲霉液体发酵纷泌 纤维素酶系特性的研究 戴四发1，贺淹才2，谢德镳3，陈鹭江3 (1．安徽科技学院动物科学学院，合肥233100； 330045) 2．华侨大学化工学院，‘泉州 362011；3．江西农业大学动物科技学院，南昌 摘要：研究黑曲霉在液体发酵条件下分泌纤维素酶系的分泌特性及不同浓度葡萄糖和酵母 膏对分泌特性的影响。结果表明，以纤维素粉或麦麸分别为单独或混合碳源时，酶系各组分 的最高酶活，比酶活及最高酶活形成时间均有较大差异，其中以混合碳源(1．o％纤维素粉+ 2．0％麦麸)最佳。葡萄糖能明显延长cl最高酶活形成时间，但酵母膏对各组分酶活几乎均 无影响；葡萄糖在浓度小于0．1％和大干0．05％时分别显著促进c1和抑制cx的分泌，而不同 浓度均能促进pG分泌，分别降低cl及提高o【和pG的比酶活；酵母膏能降低＆最高酶活及 各组分比酶活，浓度小于0．4％时对c1和pG的分泌有明显促进作用。三种组分酶的分泌规律 和酶系不同时期的均衡性极不相同，葡萄糖对c】和_BG分泌规律有较明显的改变，酵母膏对 各组分均影响极小。 关键词：黑曲霉；液体发酵；纤维素酶系；分泌特性 真菌分泌的纤维素酶系(CelMase system)是一类复杂的复合酶，一般被认为包括三种水解酶，即 4 内切葡聚糖酶[endoglucanase；1，4(1，3，1，4)．pD．ghlcm 切纤维二糖水解酶(∞H)]和肛葡萄糖苷酶(B-glueosidase；昏D—glucoside 简称阢，亦称纤维二糖酶)。C1酶与C】【酶又存有多种异构酶。只有各组分酶共同协同作用才能将纤维 畜牧业、能源开发、农业、医药卫生、食品工业、酿造业、纺织业及环境污染治理等多个领域(戴四 发等，2001)。 关于黑曲霉纤维素酶系的分泌特性方面，早期报道显示，研究者们一般都是通过固体发酵方式， 报道，本文就这方面对黑曲霉纤维素酶系在液体发酵条件下的分泌特性及一些营养物的影 了初步的探讨和分析，为今后关于真菌纤维素酶的生产和应用提供一定借鉴。 纤维素酶 1材料与方法 1．1菌种及来源 黑曲霉(Aspergillusniger)3．316，中国科学院微生物研究所菌种组提供。 1．2培养基与菌种保藏 1．2．i斜面培养基 马铃薯汁葡萄糖琼脂培养基。将孢子接种于斜面培养基，28℃培养，待形成一层绿色孢子后(约 7d)于4。C保藏备用。 1．2．2基础培养基 加浓的Mandles盐(曲音波等，1984)添加1+o％纤维素粉和2．O％麦麸。 1．2．3产酶培养基 基础培养基添加不同浓度的营养物质。 1．3孢子悬液与酶液制备 1．3．1孢子悬液制备 从新长成的斜面洗下孢子，以磁力搅拌器搅拌约20rain，打散孢子后在显微镜下计数，并调节孢 107个／ml。 子浓度至(1．00±0．05)x 1．3．2酶液制备 ml摇瓶中，转速190r／rain， 将孢子悬液以10％(v／v)接种量接人装有50Ⅱd产酶培养基的250 000 28。C发酵培养，取适量发酵液，4r／miIl离心15min，以0．1M磷酸氢二钠一0．1M柠檬酸缓冲液适当 稀释上清液即为酶液。 1．4定糖分析 DNS法，参照中山大学生物系微生物学教研室的测定方法(1979)，以葡萄糖为标准，以相同稀释 倍数的酶液作为空白对照。 1．5蛋白质测定 Bradford法(Nisizawa等，1972)，以牛血清白蛋白为标准。 1．6酶活测定和比酶活(U0)计算 参照中山大学生物系微生物学教研室(1979)测定方法。