【优化方案】中生物 第四章第2节蛋白质的提取和分离课件 北师大版选修1.pptVIP

栏目导引 新知初探 思维启动 要点突破 讲练互动 知能演练 轻巧夺冠 第四章 现代生物技术 第2节　蛋白质的提取和分离 学习导航 1.尝试蛋白质的提取和分离。 2．解释蛋白质提取和分离的基本原理。 新知初探?思维启动 一、乳酸脱氢酶同工酶的提取和分离 1．实验原理 (1)特点：可以与特定的底物进行反应，形成特殊的蓝紫色产物。 (2)提取时的要求：必须提供必要的___________ 和_______环境以保持其生物活性。 (3)分离方法：_________________。 缓冲系统 低温 琼脂糖凝胶电泳 2．实验步骤 (1)提取过程 制备匀浆：取5 g_______的动物心脏，漂洗干净后、剪碎到预冷的玻璃匀浆器中，加入25 mL________________、______研磨成匀浆 ↓ 获取酶：将匀浆收集到冰浴的离心管中，在4 ℃条件下12000 rpm离心10 min。吸取_______ 在4 ℃条件下保存备用 新鲜 磷酸提取缓冲液 冰浴 上清液 (2)分离过程 制琼脂糖凝胶电泳板：用________________配制质量分数为1%的琼脂糖凝胶，加热溶解后混匀，缓缓倒入胶床中，插入适当的梳子，室温冷却至凝胶凝固。拔出梳子，将凝胶放入 __________中，向电泳槽中加入适量的TBE电泳缓冲液 ↓ TBE电泳缓冲液 电泳槽 加样、电泳：取适量同工酶提取液与_______ 的______________混匀，取20μL加入 _______内，100 V条件下进行电泳30 min。 ↓ 染色、观察：当溴酚蓝指示剂电泳到 ____________时切断电源，取出凝胶板浸入染色液中，37 ℃染色15～30 min后，取出 _________，观察电泳结果 等量 载样缓冲液 样品孔 凝胶底部 水洗 为什么提取乳酸脱氢酶同工酶时选择的材料要用新鲜的？ 【提示】　新鲜的材料细胞中酶的活性高。 想一想 二、相关基础知识 1．同工酶 指催化相同的化学反应，而酶蛋白的 ___________、___________乃至免疫学性质不同的一组酶。 2．乳酸脱氢酶 (1)种类：一般含有5种同工酶。 (2)特点：相对分子质量相同，但所带电荷不 同，电泳的结果应该形成______个条带。 分子结构 理化性质 5 (1)同工酶之间的空间结构一定不同(×) (2)乳酸脱氢酶的催化底物是乳酸() (3)乳酸脱氢酶同工酶具有不同净电荷、相同的分子大小和形状(×) 判一判 要点突破?讲练互动 电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶 1．概念 指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 2．原理 不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力方向、大小、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 3．常用方法 (1)琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电 荷，所以，各种分子在电场中的迁移速度因各种分子的带电性质差异、分子大小、形状不同而不同，从而得以分离。 (2)聚丙烯酰胺凝胶电泳 右图表示对某蛋白质溶液进行琼脂糖凝胶电泳的结果(相似于纸层析法分离色素)，下列相关叙述不正确的是(　　) 例1 A．蛋白质上某些基团解离后可使蛋白质带电，电场中带电的蛋白质分子(或多肽)会向着与其所带电荷相反的电极移动 B．蛋白质在琼脂糖凝胶中的迁移速度完全取决于其所带净电荷多少 C．蛋白质在琼脂糖凝胶中的迁移速度主要取决于相对分子质量的大小、形状、所带净电荷 D．电泳结果表明溶液中蛋白质可能有两种 【解析】　蛋白质的氨基与羧基可发生解离，使其带正电或负电，在电场中发生迁移。蛋白质在凝胶中迁移速率主要取决于其所带净电荷的多少和性质、分子的大小和性状。 【答案】　B (1)如果蛋白质指的乳酸脱氢酶同工酶，B选项说法正确吗？ (2)如果是乳酸脱氢酶同工酶，电泳结果会出几条色带？ 【提示】　(1)正确，因为乳酸脱氢酶同工酶相对分子质量相同，所带净电荷不同。 (2)5条。 互动探究 1．凝胶材料 所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，如葡聚糖或琼脂糖。小球体内部有许多贯穿的通 道。 凝胶色谱法分离蛋白质 2．原理 凝胶色谱法也称作分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质(　　) A．路程较长，移动速度较慢 B．路程较长，移动速度较快 C．路程较短，移动速度较慢 D．路程较短，移动速度较快 例2 【答案】　D SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是(　　) A．增大蛋白质的相对分子质量 B．改变蛋白质分子的形状 C．掩盖不同蛋白质分子间的电荷差别 D