【全程复习方】（江苏专用）版高中生物 1.1、1.2DNA重组技术的基本工具 基因工程的基本操作程序配套课件 新人教版选修3.pptVIP

* 1.1、1.2 DNA重组技术的基本工 具?基因工程的基本操作程序 一、基因工程的概念理解 目的基因 体外 分子 基因重组 受体 远缘杂交不亲和 性状 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶(简称：限制酶) (1)来源：主要从_____生物中分离纯化出来。 (2)作用：识别特定的__________并切开相应两个核苷酸之间的 __________。 (3)结果：产生_________或平末端。 2.DNA连接酶 (1)种类：按来源可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。 (2)作用：在两个核苷酸之间形成__________以连接_________ _____。 原核 核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 磷酸二酯键 两段DNA 片段 3.载体 (1)种类：_____、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 (2)质粒特点： 能_________ 有一个至多个______________ 有特殊的_________ 【点拨】提取目的基因和切割载体使用同一种限制酶，目的是能形成相同的黏性末端，形成重组DNA分子。 质粒 自我复制 限制酶切割位点 标记基因 1.目的基因的获取 (1)目的基因：编码蛋白质的_____。 (2)获取方法： 从_________中获取 利用________扩增目的基因 通过___________用_________直接人工合成 基因 基因文库 PCR技术 DNA合成仪 化学方法 三、基因工程的基本操作顺序 2.基因表达载体的构建——基因工程的核心 (1)由图可知载体的组成：________、启动子、终止子、______ ___。 (2)构建目的： ①使_________在_________中稳定存在，并且可以遗传给下一 代； ②使_________能够表达和发挥作用。 目的基因 标记基 因 目的基因 受体细胞 目的基因 3.将目的基因导入受体细胞 (1)转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持____ ______的过程。 (2)常用方法： 导入植物细胞:____________、基因枪法、花粉管通道法 导入动物细胞:____________ 导入微生物细胞:感受态细胞法(或Ca2+处理法) 稳定 和表达 农杆菌转化法 显微注射技术 4.目的基因的检测与鉴定 (1)_______________→目的基因的有无 (2)分子杂交技术→________________ (3)_______________→目的基因是否翻译 (4)生物性状的表达与否→目的基因是否表达(个体水平) 分 子 水 平 DNA分子杂交技术 目的基因是否转录 抗原—抗体杂交 【点拨】启动子、终止子与起始密码子、终止密码子不同：启动子、终止子在DNA 上,在遗传信息转录时起调控作用；而起始密码子、终止密码子在mRNA上,在翻译时起作用,决定翻译的开始和结束。 基因工程的工具 1.与DNA相关的酶 (1)五种DNA相关酶的比较： 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA解旋酶 DNA (水解)酶 作用底物 作用部位 形成产物 DNA分子 磷酸二酯键 黏性末端或平末端 DNA片段 磷酸二酯键 重组DNA分子 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 子代DNA DNA分子 DNA分子 碱基对间的氢键 磷酸二酯键 形成脱氧核苷 酸单链 游离的脱氧核苷酸 (2)限制酶和DNA连接酶之间的关系图示： 2.作为载体的条件 条件 稳定并能复制 有一个至多个限制酶切割位点 具有特殊的标记基因 适应性 目的基因稳定存在且数量可扩大 可携带多个或多种外源基因 便于重组DNA的鉴定和选择 【高考警示钟】 1.切割质粒需使用限制酶1次，切割目的基因则需要使用相同的限制酶2次。因为质粒是环状DNA，而目的基因在DNA分子链上。 2.质粒DNA分子上限制酶切割位点的选择必须保证至少有一个标记基因是完整的，如果标记基因全部被切开则不便于鉴定与选择。 3.基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同，基因工程中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内，膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。 【典例训练1】(2011·浙江高考)将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是( ) A.每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内