第二章基因操作的工具酶课题.ppt

思考题 什么是限制性核酸内切酶，它们是怎样命名的？ II型限制性核酸内切酶的基本特性有哪些？ 什么是粘性末端、平末端、同尾酶和同裂酶？ 酶的单位是怎样定义的，影响酶活性的因素有哪些？ DNA连接酶的作用特点有哪些，了解这些特点有何使用价值？ 大肠杆菌DNA聚合酶I 有哪些不同的酶活力特性，各有何利用价值。 Klenow片段和大肠杆菌DNA聚合酶I有何异同？ 为什么说逆转录酶（Reverse transcriptase）是一种特殊的DNA聚合酶，其主要用途是什么？ 举例说明在基因工程中修饰性工具酶具有重要的用途。 为什么说基因工程实际上是精细的酶学操作工程？ 1、DNA连接酶作用的机理 2、DNA连接酶的反应条件 3、DNA连接的策略 第二节 DNA连接酶及其应用 1、大肠杆菌DNA聚合酶I 2、Klenow片段 3、T4 DNA聚合酶 4、逆转录酶（反转录酶） 第三节 DNA聚合酶及其应用 1、末端转移酶（terminal transferase） 2、核酸酶SI（SI nuclease） 4、碱性磷酸化酶（Alkaline phosphatase） 第四节 修饰性工具酶 基因工程的基本步骤 基因分离酶切 载体酶切 基因和载体连接 导入细菌 重组质粒繁殖 重组克隆的选择 序列分析和基因表达等研究 导入植物细胞 DNA连接反应的条件 连接反应最佳温度为37℃，但是此时粘