《植病研究技术》B卷2012-2013答案.docxVIP

植病研究技术考试题B一、名词解释 (每题2分) 1、诊断鉴定答: 诊断是明确植物是否生病，得了什么病；鉴定是将病原明确到科属甚至种。 PCR答：PCR是聚合酶链式反应的简称，是体外快速扩增DNA的方法，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。 完全抗原和半抗原能刺激动物产生抗体（免疫原性），并和抗体发生反应（反应原性）的生物大分子为抗原。同时具有免疫原性和反应原性的抗原为完全抗原，只有反应原性而没有反应原性的抗原为半抗原。灭菌与消毒：消毒指用物理或化学的方法杀死物体上的大部分微生物，灭菌是通过物理或化学方法完全除去或杀灭器物表面和内部的一切微生物。ELISA:ELISA是Enzyme-linked immunosorbent assay(酶联免疫吸附测定)的简写是一种通过酶催化的底物反应来检测抗原有无和浓度的方法。根据所用酶是标记到特异抗体上还是第二抗体上可分为直接法和间接法。二、 简答题 (每题6分)简述核酸分离纯化的原则?答: 一是保证核酸一级结构的完整性，因为完整的一级结构是核酸结构和功能研究的前提； 二是尽量排除其它分子的污染，保证核酸样品的纯度 植物病原细菌鉴定的主要有哪几方面的依据？细菌的形态生理生化性状寄主范围与症状16 rRna序列脂肪酸种类和比例列出几种常用的血清学检测技术。琼脂免疫双扩散、ELISA、DIBA、Western Blot、Tissue Blot植物病毒病的鉴定是否需要遵循柯赫尔法则？如何获得生物纯的病毒分离物？应该遵循柯赫氏法则。枯斑寄主过滤寄主专化介体钝化温度简要介绍气流传播的真菌病害常用接种方法有哪些。喷雾：将病菌制成孢子悬浮液，喷雾法喷洒到寄主叶面；喷洒：将干孢子粉与滑石粉（1：10比例）混合，喷洒在潮湿的植物表面；如白粉菌和锈菌。涂抹（刀）法：寄主表面展着性差，可用毛笔或涂抹刀蘸水在叶表面摩擦，使形成水膜，然后涂抹孢子；悬滴法：将病菌孢子或菌丝体制成悬浮液，滴于植物的叶片表面，观察发病情况。注射法和针刺法等。三、问答题 （共60分）请叙述5种以上基于PCR原理的延伸技术? (15分)答: 巢式PCR ：巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR)，使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。巢式PCR的好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此，巢式PCR的扩增非常特异。 反转录PCR ：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。 多重PCR：是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应 锚定PCR ：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 不对称PCR: 是用不等量的一对引物，PCR扩增后产生大量的单链DNA(SSDNA).这对引物分别称为非限制引物与限制性引物，其比例一般为50～100∶1.在PCR反应的最初10～15个循环中，其扩增产物主要是双链DNA，但当限制性引物(低浓度引物)消耗完后，非限制性引物(高浓度引物)引导的PCR就会产生大量的单链DNA.产生的ds-DNA与ss-DNA由于分子量不同可以在电泳中分开，而得到纯ss-DNA反向PCR : PCR只能扩增两端序列已知的基因片段，PCR可扩增中间一段已知序列，而两端序列未知的基因片段不扩增。 反向PCR的目的在于扩增一段已知序列旁侧的DNA，也就是说这一反应体系不是在一对引物之间而是在引物外侧合成DNA。重组PCR ：将两个不相邻的DNA片段重组在一起的PCR称为重组PCR。 免疫PCR: 是在ELISA的基础上建立起来的新方法，用PCR扩增代替ELISA的酶催化底物显色。PCR具有很强的放大能力，其可以定量地检测DNA和RNA，具有非常高的敏感性和特异性，因此，将与抗原结合的特异抗体通过连接分子与DNA结合，再经PCR扩增，由此定量检测抗原使敏感性高于ELISA。叙述分子生物学的中心法则并给出图示(10分)? 答: 遗传信息在细胞内的生物大分子间转移的基本法则。 指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。在某些病毒中的RNA自我复制（如烟草花叶病毒等）和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的