第十二章：基因工程所需要的条件重点.ppt

5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ RNA DNA 4dNTPs 3’ 5’ 反转录酶的5’→3’方向DNA聚合酶活性 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ DNA RNA DNA + 5’ rNMPs 反转录酶的5’→3’方向和3’→5’方向的核糖核酸外切酶活性（RNaseH） DNA及RNA的修饰酶 末端脱氧核苷酸转移酶 简称末端转移酶（terminal transferase），由大小亚基组成，在二甲胂酸缓冲液中，能够催化5’脱氧核苷三磷酸进行5’→3’方向的聚合作用，逐个将脱氧核苷酸分子加到线性DNA分子的3’-OH末端，且不需要模板。该酶为非特异性酶，4种dNTPs都可以作为它的前体物。 5’ 5’ 3’ 3’ 单链DNA DNA dNTPs (dN)n 具有3’-OH末端的单链DNA； 具有3’-OH突出末端的双链DNA。 平末端不是其有效底物，但如果用Co2+代替Mg2+作为辅助因子，也可以成为其有效底物。 受体DNA的特性： 给外源DNA片段及载体分子加上互补的同聚物尾巴，以使它们可以重组起来。 末端转移酶的主要用途： 催化[α-32P]-3’-脱氧核苷酸标记DNA片段的3’-末端：在DNA序列分析中，使用[α-32P]-3’-脱氧核苷三磷酸（不具有游离的3’-OH），可终止单核苷酸的参入作用。 催化非放射性的标记物（通常为生物素标记的核苷酸衍生物）参入到DNA片段的