一种方便酶切鉴定的！#$%表达载体改建方法.PDFVIP

一种方便酶切鉴定的 !#$% 表达载体改建方法 单志新!林秋雄!符永恒!邓春玉!余细勇广东省人民医院医学研究中心!广东 广州 ’(()( # 摘要!目的 建立一种用单限制性内切酶酶切来快速筛选重组小发夹 #$% ! !#$% 表达载体的方法# 方法 制备包含 单一限制性内切酶 !#! 识别序列的双链 *$% 插入片段! !$! 位点两侧碱基序列不互补$与 %$+! 和 ’(), 线性 化的 !#$% 表达载体 -./012314567’ !不含 809: 识别序列 构建载体 -./012314567’5*$! # 用 +$+! 和 ,(), 酶切 -./012314567’5*$! $将酶切产物与表达绿色荧光蛋白! ;= !#$% 的 *$% 模板!不含 *$! 识别序列做连接反应$构 建 ;=!#$% 表达质粒# 提取阳性克隆质粒 *$% $行 *$! 单酶切鉴定$对未被 *$! 线性化的质粒行 *$% 测序鉴 定# 结果 *$% 测序表明正确构建了 !#$% 表达载体 -./012314567’5*$! $ 以 -./012314567’5*$! 为载体构建的 ;= !#$% 候选重组子中$ 不能被 *$! 线性化的均为 ;=!#$% 表达质粒# 结论 构建了可用于制备 !#$% 表达质粒 的通用载体 -./012314567’5*$! $所引入的单一的 *$! 识别位点可以用来快速地筛选重组 !#$% 表达质粒# 关键词! #$% 干扰%小发夹 #$% %绿色荧光蛋白%载体 中图分类号! ?@) 文献标识码! % 文章编号! ’A@B56C6 ! C((@ (D5’B6’5(6 ! #$%’( )’* +,-.. -/*0/ 123 $40*$++/’ 5$6%’* *$6’+%*76%/’ )’* $8+9 +/:.$ *$+%*/6%/’ $(’76.$8+$ /($%/)/68%/’ .+%$E/5F/2GHI$?/J5F/K2LMNOPK2L512LM*Q$;8J25RJMPNS/5RK2L #1!1943812T14KUV1,/390.3/1231!M=1K-01W!+K!-/T90KU;J92L,K2L=4KX/231M;J92LYKJ’(()(M8/29 3;+%*86% =;$6%/5$ ZK,1X10K- 92 1UU13T/X1[1TK, UK4 !34112/2L 413K[\/292T 9/4-/2#$%1F-41!!/K2 -09![/,! J!/2L !/2L0141!T4/3T/K212,K2J3019!19290R!/!7 ?$%’(+ Z1,KJ\015!T492,*$%U49L[12T3K2T9/2/2L9*$!!/T1 ]T1U092^/2LO !1_J1231!OKUO‘/3O‘141O2KTO3K[-01[12T94RaO‘9!O9221901,O92,O0/L9T1,O/2TKO![900O9/4-/2O#$%O]!#$%aO1F-41!!/K2OX13TK4O -./012314567’OT9TO,/,O2KTO3K2T9/2O*$!!/T1OTKO3K2!T4J3TOT1O3/43J094O-./012314567’5*$! X13TK47 Ob/TO%$+! 92,O,(),MO T1O-./012314567’5*$!‘9!O,/L1!T1,O92,O0/L9T1,O‘/TOT1O*$%OT1[-09T1OKUOL4112OU0JK41!31231O-4KT1/2O];=aO!#$%OT9TO,/,O 2KTO/230J,1O9O*$! !/T17 OZ1O-09![/,O*$%OKUOT1O-K!/T/X1O30K21!O‘9!O1FT493T1,O92,O,/L1!T1,O‘/TO809cM O92,OT1O/2!14T1,O *$%O!1_J1231OKUOT1O2K250/2194/Y1,O-09![/,O‘9!O/,12T/U/1,O\RO!1_J1231O9290R!/!7 O@$+7.% 8( A’6.7+/’ *$%O!1_J123/2LO !K‘1,OT9TO-./012314567’5*$!‘9!O3K4413T0RO3K2!T4J3T1,O92,OT1O-09![/,!O41!/!T92TOTKO*$! ,/L1!T/K2O‘141O900O413K[\/292TO X13TK4!O123K,/2LO;=O!#$%7 OZ1O3K2!T4J3T1,O-./012314567’5*$!392O\1OJ!1,O9!O9OJ2/X14!90OX13TK4OTKO3K2!T4J3TOT1O!#$%O 1F-41!!/K2O-09![/,MO92,OT1