质粒提取和酶切鉴定.pptVIP

实验一 质粒提取及酶切鉴定 P158 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 基因工程（genetic engineering）是指采用人工方法将不同来源的DNA进行重组，并将重组后的DNA引入宿主细胞中进行增殖或表达的过程。 相关基础知识 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 目的基因 工具酶 载体 基因工程相关物质 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 质粒 存在于细菌细胞内、染色体外、共价闭合的 小型环状DNA分子(covalent closed circular DNA)。 具有自我复制功能。 带有抗性基因及表型识别等遗传性标记物 经改造后具有多克隆位点。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 质粒 (plasmid) 特点 能在宿主细胞内独立自主复制；带有某些遗传信息, 会赋予宿主细胞一些遗传性状 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 限制性核酸内切酶： ------基因工程的手术刀 是分子生物学研究中的一种工具酶，能识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 如：EcoRⅠ和HindⅢ的识别序列和切口是： ? EcoRⅠ：G↓AATTC ? HindⅢ：A↓AGCTT 概念 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统（restriction-modification system），限制外源DNA， 保护自身DNA。 作用 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 分类 酶结构、作用、识别及切割特异性的不同 分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，基因工程技术中常用Ⅱ型 Ⅰ型酶具有限制和DNA修饰作用，且识别及切割位点不同（下游100-1000bp） Ⅲ型酶具有限制和DNA修饰作用，识别及切割位点不同（相距较近） Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （1）识别及切割位点相同 （2）识别序列通常为4～8bp的回文结构； （3）切割可产生两类切口，三种末端。 Ⅱ型限制酶特点 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Ⅱ型酶识别序列特点— 回文结构(palindrome) 切口 ：平端切口、粘端切口 GGATCC CCTAGG Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CC