分离纯化方法详解.ppt

第一节 原料的选择和预处理 一、原料的选择 选择有效成分含量高的材料 来源丰富易得 工艺简单易行 成本低，效益好 第二节 提取分离 一、提取分离前的文献调研 在实验前要充分查阅相关文献资料，了解目的物的理化性质、生物活性，建立相应的实验方法。 对于未知物质的试验，要经过各种方法的比较和摸索。 实验过程中要认真做好实验记录。 二、提取方法 浸提、回流提取、水蒸气蒸馏、 超声波提取、微波提取、超临界流体提取 三、影响提取的因素 1.溶剂：对目的物具有最大溶解度 2.温度 3.pH：避免在目的物的等电点附近 4.盐浓度：保护及助溶作用 5.物料比、提取时间、提取次数 四、活性物质的保护措施 1.采用缓冲系统 2.添加保护剂 3.抑制水解酶作用 4.其他保护措施：避免紫外光、强烈搅拌、过酸、过碱或高温、高频震荡、防止氧化 五、提取液的分离 1.自然沉降：处理量大，相对密度悬殊 2.过滤：多孔材料截留固体 3.离心：液-固，液-液 （离心过滤、离心分离、离心沉降） 第三节 纯化方法 一、分离纯化依据 根据分子形状和大小不同进行分离 根据分子电离性的差异进行分离 根据分子极性大小及溶解度不同进行分离 根据物质吸附性质的不同进行分离 根据配体特异性进行分离 二、合理的分离纯化方法 根据目的物的理化性质与生物学性质，依具体实验条件而定。 分离纯化初期使用方法的选择 从低分辨率的方法开始（萃取、沉淀、吸附），分离量大兼有分离提纯和浓缩作用。 各种分离纯化方法的使用程序 各种分离方法的交叉使用对于除去大量理化性质相近的杂质较为有效。 分离纯化方法的评估 提高分离效率，减少分离过程步骤，缩短分离操作时间，达到提高产品收率与活性、降低生产成本的目的。 三、分离纯化方法 沉析技术 结晶技术 层析技术 电泳技术 膜分离技术 离心技术 透 析（dialysis） 超过滤（ultrafiltration） 复习题 1.原料的粉碎方法？ 2.提取方法？ 3.活性物质的保护措施？ 4.提取液的分离方法？ 5.区别离心过滤、离心分离和离心沉降 6.分离纯化依据？ 7.分离纯化方法的评价标准？ * * 第一章 分离纯化方法 二、原料的粉碎 半透膜袋 蛋白质溶液 透析液 磁棒 磁力搅拌器 透析是利用常压下蛋白质等大分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子物质如无机盐单糖等分开。 常用的半透膜： ?玻璃纸 ?火绵纸 ? 其他改型纤维素材料 主要用于分离相对分子质量差别较大的物质（103） 利用压力、抽滤（A）或离心力（B）等多种形式，强行使水和其它小分子溶质通过半透膜，而蛋白质被截留在膜上，以达到浓缩和脱盐目的。 滤膜有多种规格，可选择性的截留相对分子量不同的蛋白质。 滤膜 抽气 滤膜 离心 A B