cDNA-AFLP技术在植物差异基因表达研究上的应用.pdfVIP

cDNA-AFLP技术在植物差异基因表达研究上的应用 尚雨丝 2，罗 蕊 2，王文跃 2，王 超 2，陈永胜 ，2 （ 内蒙古民族大学农学院，内蒙古通辽 028043；2 内蒙古自治区高校蓖麻产业技术研究中心，内蒙古通辽 028043） 〔摘 要〕cDNA AFLP 技术是能够对生物体转录组进行全面分析的新技术，因其具有多态性丰富、稳定性高、 效率高等优点，被广泛应用于基因表达研究.随着科技发展，该技术不断得到完善与创新，并取得了很多研究成 果.本文简单介绍了cDNA AFLP 技术的基本原理及技术特点，概述了其在植物差异基因表达上的应用现状，并 对其发展前景进行了展望. 〔关键词〕cDNA AFLP ；差异基因表达 〔中图分类号〕Q786 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1671 0185（2014）03 0319 04 cDNA- AFLP and Its Application in Study about Differences in Gene Expressions Analysis of Plants SHANG Yu si 2, LUO Rui 2, WANG Wen yue 2, WANG Chao 2,CHEN Yong sheng 2* （1. College of Agriculture, Inner Mongolia University for Nationalities, Tongliao 028043，China；2. Inner Mongolia Industrial Engineering Research Center of Universities for Castor, Tonglaio 028043,China） Abstract：cDNA AFLP technique is a new technology to conduct a comprehensive analysis of an organism s transcriptome. With the advantages of rich polymorphism, high stability, high efficiency, it has been widely used to study gene expression. With advances in science, the technology has been continuously improved and innovation, and made a lot of research results. The paper introduces the basic principles and the technical characteristics of cDNA AFLP and outlines the application of the status on differences in gene expressions of plants. And its development prospects were discussed. Key words：cDNA AFLP；Differences in gene expressions 随着现代分子生物学的发展，分子标记的出现，在植物遗传分析技术中引起了的 场巨大革命 .cDNA AFLP技术是 Bachem等 2 人在AFLP技术基础上创新出的RNA指纹图谱技术，以RNA逆转录的双链cDNA为模板，进行接头连接以及限 制性内切酶酶切后，扩增两次，将产物进行聚丙烯酰氨凝胶电泳后分析.由于PCR过程的反应条件严谨，所以具有灵敏度 高，结果可靠，假阳性低，重复性好等优点，被广泛应用于植物基因表达特别是差异基因表达的研究.近年来该技术不断完 善，尤其在基因功能全面分析上，它的应用价值较其他分子标记的方法显示出明显的优越性，并开始应用在矮化基因研究 上 3 ，尤其在蓖麻 4 、桃 5 、南瓜 6 、甘蔗 7 等矮化基因鉴定方面，此技术已得到成功应用. 1 cDNA-AFLP技术的基本原理和流程 cDNA AFLP技术是将RT PCR与AFLP相结合、用来分析植物mRNA差异表达的技术.首先，提取总RNA，纯化mRNA 后逆转录为单链cDNA，以内切酶RNA酶H造成cDNA /RNA杂交链的切 以及缺 ，在大肠杆菌DAN聚合酶和前面形成 的RNA碎片引导下形成第二链，连接酶封闭缺 ，使用2个分别可识别6 bp和4 bp序列的限制性内切酶进行双酶切，酶切 产物与设计好的人工接头连接，然后进行预扩增，所用引物是与接头序列互补的引物.预扩增出的产物作为选择性扩增的 模板，其量是很大的，所以cDNA AFLP技术对初始