整理实验设计一探索.docx

整理实验设计一 喷施小分子有机物对小油菜生长发育和养分吸收的影响 一、土壤样品的采集和处理 1、供试土壤的选择 供试土壤：中国农业科学院德州实验站禹城实验基地多年匀地试验耕层土壤，质地为轻壤。 主养分含量：全氮 0. 65 g / kg、速效磷（ P2 O5 ）16. 29 mg / kg、速效钾（ K2 O）90. 15 mg / kg、有机质 9. 43g / kg、PH 7. 98。 1.1土壤全氮测定：半微量开氏法 【主要仪器】消煮炉；50ml或100ml开氏瓶；半微量定氮蒸馏装置；150ml锥形瓶；5ml或10ml半微量滴定管。 试剂：（1）硫酸。 ρ=1.84g·ml-1，化学纯； （2）10mol·L-1NaOH溶液。 称取NaOH（AR）400g（工业用固体NaOH，称420g），于硬质玻璃烧杯中，加蒸馏400ml溶解，不断搅拌，以防止烧杯底角固结，冷却后倒入塑料试剂瓶，加塞，防止吸收空气中的CO2，放置几天待Na2CO3沉降后，将清液虹吸入盛有约160ml无CO2的水中，并以去CO2的蒸馏水定容1L加盖橡皮塞（浓度约为40% W/V）。 （3）甲基红—溴甲酚绿混合指示剂。即0.099g溴甲酚绿和0.066g甲基红于玛瑙研钵中，加少量95%酒精，研磨至指示剂完全溶解，用95%乙醇定容100ml。此指示剂变色范围pH 4.4(红)―5.4（蓝），贮存期不超过2个月。 （4）20g·L-1 H2BO3—指示剂[注1]。 称取硼酸（分析纯）20g溶于约950ml水中，加热搅动直至H3BO3溶解，冷却后，加入混合指示剂20ml混匀（每10mlH3BO3加入2ml指示剂），并用稀酸或稀碱调节至紫红色（pH约4.5），加水稀释至1L混匀，贮存在塑料瓶中备用。宜现配。 （5）混合催化剂。K2SO4:CuSO4:Se=100:10:1即100g K2SO4（化学纯）、10g CuSO4 ·5H2O（化学纯）、和1g Se粉混合研磨，通过80号筛充分混匀（注意戴口罩），贮于具塞棕色磨口瓶中。消煮时每毫升H2SO4加0.37g混合加速剂。 （6）高锰酸钾溶液。25g高锰酸钾（分析纯）溶于500ml无离子水，贮于棕色瓶中。 （7）1:1硫酸（化学纯、无氮、ρ=1.84g·ml-1）。硫酸与等体积水混合。 （8）还原铁粉。磨细通过孔径0.15mm（100号）筛。 （9）辛醇。 （10）0.01 mol·L-1（1/2H2SO4）标准液。量取H2SO4（化学纯、无氮、ρ=1.84g·ml-1）2.83ml，加水稀释至5000ml，然后用标准碱或硼砂标定之，得0.02 mol·L-1（1/2H2SO4）标准溶液。将0.02 mol·L-1（1/2H2SO4）标准溶液用水准确稀释一倍。 标定：平行3份，空白3份。称取1.9068g硼砂[注2]（Na2B4O7·10H2O），精确至0.0001g，加水溶解后稀释至500ml，得0.0500mol/L硼砂标准溶液。吸取20.00ml硼砂标准溶液置于150ml锥形瓶中，加1滴甲基红-溴甲酚绿混合指示剂，用盐酸标准溶液滴定至溶液由蓝色变为紫红色为终点。同时做空白试验。盐酸标准溶液的浓度按下式计算： 式中： C—盐酸标准溶液浓度，mol/L； C1—硼砂标准溶液浓度（0.02000），mol/L； V1—硼砂标准溶液体积，ml； V2—盐酸标准溶液用量，ml； V0—空白试验消耗盐酸标准溶液体积，ml； 【测定步骤】（1）称取通过孔径0.149mm筛（即100目筛） [注3] 风干土样1.0000g（含氮约1mg）[注4]，同时测定土样水分含量，最后换算成烘干样计算结果。 （2）土样消煮[注5] ①不包括硝态氮和亚硝态氮的消煮：将土样小心移入干燥的消煮管底部，加少量无离子水（0.5～1ml）湿润土样后[注6]，加入加速剂1.85g和浓硫酸5ml，摇匀，将开氏瓶倾斜置于变温电炉上，最初宜用低温，待瓶内无泡沫发生（约10min～15min），提高温度（375℃，4h）使消煮的土液保持微沸，加热的部位不超过瓶中的液面，以防瓶壁温度过高而使铵盐受热分解，导致氮素损失。消煮的温度以硫酸蒸气在瓶颈上部1/3处冷凝回流为宜。待消煮液和土粒全部变为灰白稍带绿色后，再继续消煮1h。（个别土样如果分解困难，消煮液转清亮的过程较慢，必须延长半小时左右。）消煮完毕，取下凯氏瓶冷却，准备蒸馏。在消煮土样的同时，做两份空白测定，除不加土样外，其他操作皆与测定土样相同。 ②包括硝态氮和亚硝态氮的消煮：将土样送入干燥的开氏瓶（或消煮管）底部，加高锰酸钾溶液1ml，摇动开氏瓶，缓缓加入1:1硫酸2 ml，不断转动开氏瓶，然后放置5min，再加入1滴辛醇。通过长颈漏斗将0.5g(±0.01g)还原铁粉送入开氏瓶底部，瓶口盖上小漏