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色谱基础理论 色谱法及其分类 色谱流出曲线和术语 色谱分离基本原理 色谱基础理论 俄国植物学家M.Tswett于1903年首先提出色谱法，分离植物绿叶色素混合液。 五十年代第一台色谱仪问世 色谱基础理论 色谱法是一种分离方法，它利用被分离的诸物质在互不相溶的两相中分配系数的微小差异进行分离。 当两相作相对移动时，使被测物质在两相之间进行反复多次分配，使原来微小的差异累加产生了很大的效果，形成差速迁移，使各组分在柱内移动的同时逐渐分离，以达到(分离)、(分析)及(测定)一些物理化学常数的目的。 色谱分析技术有广泛的应用领域已广泛地用于石油化工、有机合成、生理生化、医药卫生、环境监测、刑事侦查、生产在线控制，乃至空间探索等许多领域，以解决各种分离分析课题。 色谱基础理论 色谱分类 一、按两相状态分类 流动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相，色谱柱 流动相不同：气相色谱、液相色谱 固定相不同：气相可分为：气固、气液 液相可分为：液液、液固 色谱基础理论 气相色谱技术基础 在分析化学领域，科学家们利用气相色谱 (GC) 技术对可气化但不分解的化合物进行分离和分析。他们经常使用 GC 测试特定物质的纯度，或者分离混合物的组成并测定各自的相对含量。 同时还利用 GC 对挥发性分析物进行定性和定量分析。 气相色谱仪使用到流动相和固定相。也就是说，由一种流动的气体携带样品通过仪器内部的固定相载体（称之为色谱柱的玻璃管或金属管）。 色谱分类 二、按分离原理分类 分配色谱 吸附色谱 色谱基础理论 三、按固定相的形式分类 色谱基础理论 柱色谱——采用柱管进行分离的色谱称为柱色谱。内径小于1.0mm的柱管一般都可称为毛细管柱。也有将极细的固定相填充于毛细管中进行分析，即填充毛细管柱。 纸色谱——含水滤纸为固定相，在滤纸上直接用溶剂展开实现混合物的分离。 薄层色谱——经典方法。近年发展起来的对溶剂加压、离心强迫流动技术，使薄层色谱样品处理能力达到制备色谱水平。 棒色谱——是薄层色谱的变异，将吸附剂研碎后涂敷在石英棒上，再进行色谱操作。 柱色谱的最大优点是柱效能高、分析速度快、定量较为可靠，而后三者的设备和操作都较简单，易于普及。 色谱的特点 1．分离效率高：可在很短的时间内分离多达二、三百个组分的复杂物质，柱效能可达106的理论板。 2．检测能力强：可以检测出10-11~10-15克级的痕量组分，能满足环境检测、农药残留等大量日常检测分析的需要。 3．样品用量少：样品用量一般为微升级，少的可达纳克级。 4．适用范围广：几乎所有与化学有关的领域都有其用武之地。 色谱基础理论 化合物的分离 根据化合物与色谱柱固定相亲和力的不同而实现分离。亲和力小的化合物将较早从色谱柱里洗脱出来，而亲和力大的化合物则延后洗脱。 色谱柱内部的作用原理 气相色谱利用气体流动相使样品通过色谱柱，色谱柱内部含有填充物或者其内表面有涂层。在多数情况下，相比液相色谱柱，气相色谱柱的内径更小，柱长更长。 当气相色谱柱受热后，化合物将根据沸点开始进行分离。当色谱柱的固定相换成极性固定相后，色谱柱的分离能力也随之改变。沸点和化合物极性共同影响化合物的分离。 气相色谱柱 液相色谱柱 色谱柱内部的作用原理 tr2-tr1 较好分离 较差分离 较好分离 较差分离 Wb1 Wb2 Wb1 Wb2 对比 对比 tr2-tr1 2015 年 1 月 5 日 色谱流出曲线 色谱基础理论 色谱基础理论 调整保留时间 相对保留时间 由色谱流出曲线可以实现： 依据色谱峰的保留值进行定性分析 依据色谱峰的面积或峰高进行定量分析 依据色谱峰的保留值以及区域宽度评价色谱柱的分离效能 色谱基础理论 色谱基础理论 分离度 R=1.5，相邻两峰完全分离 分离度 — 基线分离 分离度是对色谱柱分离目标峰能力的描述。 分离度将受到柱效 (N)、选择性 (a) 和保留 (k) 的影响。 实现可测量的分离和定量的最小分离度为 1 可辨别出两个等高峰之间峰谷的最低分离度为 0.6 稳定的分析方法通常需要分离度达到 1.7 或更高 1.6 被认为是达到基线分离，并且可确保获得最准确的定量分析结果的标准分离度 Rs ≥ 1.5 tri 化合物 i 的保留时间 Wbi 化合物 i 的峰底宽 关键参数理论塔板高度 (H) L 柱长 (mm) N 理论塔板数 另一个衡量柱效的方法是理论塔板高度 H，通常以 mm 表示。 理论塔板越短，给定柱长的色谱柱的塔板数更多，也就是